肉苁蓉苯乙醇苷衍生物辐射防护作用及其机制研究

随着人类接受辐射机会的增多,辐射对人体的危害日趋严重。目前临床尚缺乏有效的抗辐射药物，从天然产物中寻找和发掘新的抗辐射药物已成为必然。本项目前期研究基础显示：肉苁蓉苯乙醇总苷提取物具有良好的辐射防护活性；后续的研究又对从肉苁蓉中制备的系列苯乙醇苷衍生物进行了活性初筛，发现它们均具有一定的辐射防护作用，但抗辐射活性差异较大。本项目基于前期的研究工作，拟采用现代药理学和分子生物学技术，于离体实验研究苯乙醇苷衍生物对辐射损伤DNA的修复作用和对胸腺细胞损伤的干预作用；于在体实验研究苯乙醇苷衍生物对辐射损伤小鼠敏感组织病理改变、氧化应激水平、造血功能和免疫功能影响，并对其抗辐射作用的构效关系进行考察，综合分析，以阐明肉苁蓉苯乙醇苷衍生物抗辐射作用机制。通过本项目研究，力求发现新的抗辐射天然药物，并为开发以苯乙醇苷为母核结构的新型辐射防护剂提供理论依据。

前期研究显示, 肉苁蓉苯乙醇总苷对辐射损伤小鼠具良好保护作用。基于以往工作，研究从细胞和分子水平对其辐射防护作用进行深入探索，获以下结果：.1．苯乙醇苷是肉苁蓉抗辐射作用物质基础，项目基于膜分离技术对苯乙醇苷进行富集纯化研究。结果显示，经不同截留分子量超滤膜和纳滤膜处理，产品出膏率和目标成分含量存在明显差异，选择截留分子量30000膜超滤、400膜纳滤效果较好。研究为苯乙醇苷生产纯化提供了新的制备思路。.2．构建人皮成纤维细胞HSF辐射损伤模型，对苯乙醇苷抗辐射活性进行筛选，并初步推断其构效关系。6种苯乙醇苷对辐射损伤HSF干预结果表明，它们均能显著提高辐射损伤HSF增殖活性，以毛蕊花糖苷活性最强。.3．以活性筛选为导向，在细胞和分子水平研究毛蕊花糖苷抗辐射作用.（1）皮肤是机体接受外照射的必经途径，HSF辐射后常失去分裂生长能力。研究探讨了毛蕊花糖苷对辐射损伤HSF凋亡率、周期、胞内ROS水平以及凋亡相关蛋白表达的影响。结果显示：它能显著降低辐射诱导的HSF早期凋亡率，缓解辐射损伤导致的G0/G1期阻滞，同时降低辐射损伤导致的胞内ROS水平升高，提高其辐射抗性。还可有效抑制细胞中Bax蛋白水平上调和Bcl-2、proaspase-3蛋白水平下调，减少ERK和JNK活化。 .（2）以机体最主要免疫细胞—淋巴母细胞AHH-1为实验对象，研究毛蕊花糖苷对其细胞凋亡、细胞周期、细胞内ROS水平、MAPK通路信号分子及线粒体途径凋亡调控蛋白表达的影响，探讨它对免疫功能辐射防护作用机制。结果显示：它能显著降低AHH-1早期凋亡率，提高活细胞比例，缓解辐射导致的G0/G1期阻滞，提高S期DNA含量，同时降低细胞内ROS水平。还可显著抑制细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、procaspase-3、ERK、JNK及磷酸化ERK、JNK的异常表达。.4．以苯乙醇总苷为主要功效成分制备了防晒制剂，发现它可较好缓解紫外辐照对小鼠皮肤的损伤，对制剂的质量控制也进行了研究。.5．还以从肉苁蓉中分离得到的苯乙醇苷等单体为研究对象，基于酵母双杂交技术对它们进行了降血脂活性筛选。