益气活血方通过"DAMPs-PRRs-巨噬细胞"途径影响动脉粥样硬化斑块易损性的机制

益气活血方宁心痛颗粒是临床治疗冠心病不稳定性心绞痛的有效中药制剂，其干预动脉粥样硬化斑块易损性的机制亟需阐明。巨噬细胞通过"DAMPs-PRRs"发生泡沫化及炎症免疫持续激活是增加斑块易损性的重要途径。前期研究发现，宁心痛颗粒通过抑制不稳定性心绞痛患者及易损斑块模型兔的炎症免疫反应，从而可降低斑块的易损性。在此基础上，本课题组提出宁心痛颗粒通过"DAMPs-PRRs-巨噬细胞"途径降低动脉粥样硬化斑块易损性的假说，拟在体外培养巨噬细胞，观察DAMPs（mmLDL/oxLDL/HSP60）触发细胞PRRs（SRs/TLR4），诱导泡沫化，激活炎症免疫反应，以宁心痛颗粒的有效组分及血清药进行干预，采用siRNA、Western blot等分子生物学、免疫学方法，验证假说，延续和深入研究宁心痛颗粒在细胞、分子水平干预斑块易损性的部分作用机制。

宁心痛颗粒是临床治疗冠心病不稳定性心绞痛的有效医院制剂，主要功效为益气活血。在“转化医学”风向标指导下，沿着“临床-动物-临床”的新药研发模式，为进一步探研其作用机制，本课题组开展了“益气活血方通过‘DAMPs–PRRs–巨噬细胞’途径影响动脉粥样硬化斑块易损性的机制”的研究。研究主要分为三部分：（1）益气活血方通过“oxLDL- SRs-巨噬细胞”途径影响THP-1源性巨噬细胞泡沫化的机制研究；（2）益气活血方通过“mmLDL-TLR4-巨噬细胞”途径影响THP-1源性巨噬细胞吞噬功能的机制研究；（3）益气活血方通过“HSP60-TLR4-巨噬细胞”途径调节THP-1源性巨噬细胞炎症免疫激活的机制研究。研究结论：（1）益气活血方“宁心痛颗粒”主要益气、活血的有效组分黄芪多糖、藁本内酯以及宁心痛颗粒含药血清均能通过调节脂质体的表达，抑制巨噬细胞对oxLDL的净摄入，减少泡沫化；其抑制巨噬细胞泡沫化的作用部分通过PPARγ途径。益气活血复方抑制巨噬细胞泡沫化、进而稳定易损斑块之效应，优于主要益气或（合）活血组分。（2）mmLDL可使THP-1源性巨噬细胞TLR4、Syk、Erk、Paxillin磷酸化水平升高，从而促进细胞骨架蛋白的重组，增强吞噬功能。黄芪多糖、藁本内酯、黄芪多糖+藁本内酯、宁心痛颗粒含药血清均可不同程度抑制mmLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞TLR4、Syk、Erk、Paxillin磷酸化，从而降低细胞骨架蛋白重组，减弱吞噬功能。含药血清的作用强于黄芪多糖、藁本内酯及黄芪多糖+藁本内酯。益气活血复方抑制巨噬细胞对mmLDL的反应、减少对nLDL和oxLDL的摄取、进而稳定易损斑块之效应，优于主要益气或（合）活血组分。（3）rhHSP60可诱导THP-1源性巨噬细胞产生炎症因子TNF-α、IL-6，上调其TLR4、MyD88、磷酸化NF-κB蛋白表达；黄芪多糖、藁本内酯、黄芪多糖+藁本内酯、宁心痛颗粒含药血清均可不同程度抑制rhHSP60导致的THP-1源性巨噬细胞TLR4、MyD88、磷酸化NF-κB基因及蛋白表达上调，继而抑制炎症因子升高；含药血清的该效应优于黄芪多糖、藁本内酯、黄芪多糖+藁本内酯。益气活血复方抑制巨噬细胞对rhHSP60的反应、减少炎症因子的释放、进而稳定易损斑块之效应，优于主要益气或（合）活血组分。