体外膜肺支持下的肺泡II型上皮细胞移植促进肺损伤修复的作用及调控机制

肺泡上皮细胞(AEC)的发育性增殖是肺损伤修复的关键机制，本研究探讨同种AEC移植促进幼年动物急性肺损伤（ALI）的肺泡修复和增殖,包括：(1)新生猪II型AEC纯化并移植入新生猪肺后，在体内的生物学特征及定植、转分化特点;2）建立体外膜肺（ECMO）支持下的幼猪ALI模型，并行新生猪经气道AEC-II的肺内移植，观察定植、转分化的特点及对肺损伤修复结局的影响;3）ECMO支持下的ALI幼猪经气道移植经TGF-β1及KGF基因转染及TGF-β1基因沉默后的AEC-II后的生物学及对肺损伤修复的影响，探讨体内移植AEC-II的转分化作用机制,阐明TGF-β1及其下游通路的调节是否对AEC-II在体内转分化的调控意义。目前已经建立了ECMO支持下幼猪ALI模型并可以跟踪到停ECMO后一周活体功能测定，并初步完善了新生猪AEC-II纯化培养和生物学鉴定技术。

项目结题摘要：.1. AEC Ⅱ培养及标记研究发现：1）胰酶/弹力蛋白酶混合酶消化15min，在猪IgG粘附纯化基础上，结合贴壁1次进一步纯化，首个24小时利用5%血清浓度培养基培养是新生猪AEC Ⅱ的最佳分离纯化方式。2）PKH26荧光染料标记终浓度8×10-6 mmol/L是AEC Ⅱ的理想标记条件。.2. 呼吸机支持下经气道PKH26标记的新生猪AEC Ⅱ移植治疗急性肺损伤的研究发现：1）同种异体新生猪AEC Ⅱ经气道移植可在内毒素诱导ALI和正常幼猪肺部定植，且ALI组SRY mRNA表达显著高于正常组。2）AEC Ⅱ经气道移植能减轻ALI幼猪肺损伤，呼吸力学、氧合、血流动力学状态有不同程度改善。3）AEC Ⅱ移植动物血浆和BALF炎症因子表达有不同程度改善。.3. 体外膜肺(ECMO)支持下经气道PKH26标记的新生猪AEC Ⅱ移植治疗急性肺损伤的研究发现：1）同种异体新生猪AEC Ⅱ经气道移植可在内毒素诱导ALI和正常幼猪肺部定植，且ALI组SRY mRNA表达显著高于正常组。2）AEC Ⅱ经气道移植能减轻ALI幼猪肺损伤，呼吸力学、氧合、血流动力学状态也有不同程度改善。3）AEC Ⅱ移植动物血浆和BALF炎症因子表达也有不同程度改善。.4. 为探索AEC II移植入损伤的幼猪肺是否可能主动性影响肺内组织细胞在损伤后的组织结构重塑，我们探讨用构建 pEGFP-N1-TGF-β1质粒，并建立脂质体介导的质粒转染原代培养AEC Ⅱ方法，作为深入研究肺损伤后修复机制的手段，并拓展AEC II移植的药理学作用价值及机制。