两种八角莲属植物中鬼臼毒素与自身黄酮类成分的协同抗前列腺癌机制研究

鬼臼毒素作用于微管蛋白，抑制纺垂体形成，具有很强的抗癌活性，然而毒副作用及癌细胞的耐药性限制了其临床应用，如何减毒增敏一直是此类药物研发的热点。我们研究发现，八角莲富含鬼臼毒素及黄酮，并且总黄酮可显著增强鬼臼毒素的抗癌作用。基于1)黄酮本身的低毒性；2) 黄酮可减弱鬼臼毒素对维管蛋白的毒性；3)黄酮对耐药蛋白的抑制作用，我们推测黄酮可通过减毒增敏效应而协同鬼臼毒素的抗癌作用。.为证实此假设，本项目拟从两种八角莲植物中分离和鉴定黄酮类成分，阐明其与鬼臼毒素联合运用对前列腺癌的体内、体外协同抑制活性；通过分析癌细胞内耐药蛋白表达和对鬼臼毒素的摄取来探讨黄酮对鬼臼毒素的增敏机制；从前列腺正常细胞中纺垂体的形成和对维管蛋白作用位点的竞争性结合来探讨黄酮对鬼臼毒素的减毒机制。本项目的实施可首次阐明同一植物内部两类成分的协同抗癌作用及增敏减毒机制，为开发新型高效低毒抗肿瘤组合药物提供理论依据。

鬼臼毒素作用于微管蛋白，并抑制纺垂体的形成，具有很强的抗癌活性，然而毒副作用及癌细胞的耐药性限制了其临床应用，如何减毒增敏一直是此类药物研发的热点。我们研究发现，八角莲中存在大量鬼臼毒素及黄酮类化合物，并且总黄酮可显著增强鬼臼毒素的抗癌作用。基于(1)黄酮本身的低毒性；(2)黄酮能减轻抗癌药对正常细胞的毒性；(3) 黄酮与鬼臼毒素作用于维管蛋白的同一位点；(4)黄酮对耐药蛋白的抑制作用，我们推测黄酮类成分可通过减毒增敏效应而协同鬼臼毒素的抗癌作用。.项目开展以来，我们已从八角莲中分离并鉴定黄酮及鬼臼毒素类化合物15个；活性评价结果表明，鬼臼毒素类化合物的抗前列腺癌活性强于黄酮类化合物，但黄酮Quercetin可显著增强鬼臼毒素对前列腺癌细胞LNCaP增殖的抑制作用，也可显著增强去甲基鬼臼毒素对前列腺癌细胞LNCaP增殖的抑制作用，并且黄酮对癌细胞摄取鬼臼毒素有促进作用。最后，我们从分子水平（微管蛋白与分子对接）、细胞水平（细胞形态，膜电位，微管形态）和动物水平（死亡率，肝功能，肾功能及氧化应激）等方面系统研究了黄酮（槲皮素、山奈酚）对鬼臼毒素中毒的保护作用。我们的研究首次揭示了黄酮与鬼臼毒素联合运用时，黄酮对鬼臼毒素的增效减毒作用，为高效低毒抗肿瘤组合药物的研发提高了理论依据。此外，含鬼臼毒素的中药多，中毒案例时有发生，我们的研究对于鬼臼毒素中毒的治疗亦具有重要意义。在完成项目研究任务的同时，我们对与项目密切相关的研究：其它与黄酮类似的天然多酚（如姜黄素）对鬼臼毒素中毒的拮抗作用与鬼臼毒素的结构修饰进行了有益的探索。.本课题已获得授权发明专利1项；发表SCI论文2篇（PLoS One. 2013； Toxicology and Applied Pharmacology 2012，均已正式发表）、中文核心期刊论文1篇、会议论文3篇、另有一篇SCI论文正在修稿中；本课题已培养硕士研究生2名，博士研究生1名（均已毕业），这些成果请参见附录。因此，我们已按原计划完成任务，我们将以此项项目研究为基础，申请后续基金，对部分工作进行深入研究。