从肠道菌群调控肠上皮细胞TLR9信号通路探讨解毒祛瘀滋阴方治疗SLE的机制

Systemic lupus erythematosus (SLE) is a relatively common systemic, with multiple organs involved, multi-system autoimmune disease, and the progression of SLE disease was closely related to intestinal dysbiosis and activation of the TLR9 signal pathway. Previous studies have indicated that Jieduquyuziyin can modify intestinal microbiota and inhibit TLR9 expression. In addition, TLR 9 is an important receptor for the recognition of intestinal microbiota in intestinal epithelial cell (IECs). Therefore, Jieduquyuziyin may treat SLE by regulating TLR9 in intestinal epithelial cells induced by intestinal microbiota. This study conducted in vitro experiments with IECs to illustrate the role of microbial transformation when Jieduquyuziyin regulates TLR9 expression, and the experiments also used selected MRL/lpr lupus mice to investigate the intervening effects of Jieduquyuziyin on intestinal microbiota stimulating TLR9 signaling pathway. We hope to explain the significance of the interaction between intestinal microbiota and tradition Chinese medicine during the treatment of diseases.

系统性红斑狼疮（SLE）是一种累及多器官系统的自身免疫性疾病，其发病与肠道菌群失调及TLR9信号通路活化相关。前期研究发现，解毒祛瘀滋阴方在治疗SLE过程中，能修复紊乱的肠道菌群和抑制TLR9信号通路。在肠上皮细胞中，TLR9是一种重要识别肠内细菌的受体。因此，解毒祛瘀滋阴方与肠道菌群互作，可能通过调控肠上皮细胞内TLR9信号通路达到治疗SLE目的。本课题拟基于肠上皮细胞体外培养实验，研究肠道菌群转化对解毒祛瘀滋阴方调控TLR9信号通路的影响；基于MRL/lpr狼疮小鼠模型，研究解毒祛瘀滋阴方干预对肠道菌群调控肠上皮细胞TLR9信号通路的变化。我们希望通过上述研究，阐述中医药与肠道菌群互作在治疗疾病过程中的意义。

系统性红斑狼疮（SLE）是一种累及多系统的自身免疫学疾病，以机体产生自身抗体为主要特征。解毒祛瘀滋阴方是治疗SLE有效复方之一，临床上可显著改善SLE病情。以往研究提示解毒祛瘀滋阴方可能通过干预肠道菌群，调控肠上皮细胞的TLR9表达，达到治疗SLE的目的。因此本项目围绕上述假说，进行科学论证。（1）在MRL/lpr小鼠未发病前，采用抗生素和粪菌移植方法短期干预肠道菌群，结果显示抗生素可加重小鼠狼疮病情和抑制解毒祛瘀滋阴方的治疗效果，移植C57BL/6小鼠的肠道菌群后可显著缓解狼疮病情，但也抑制解毒祛瘀滋阴方疗效，肠上皮细胞TLR9表达与小鼠狼疮病情呈正相关；（2）基于体外厌氧培养体系，制备解毒祛瘀滋阴方经肠道菌群作用的转化液，比较水煎液和转化液对TLR9高表达Caco-2细胞株的基因表达影响，结果显示解毒祛瘀滋阴方水煎液和转化液均能显著降低TLR9和MyD88基因的表达，但对NF-B和IFN-基因影响不显著。此外，水煎液和转化液的作用没有差异，这说明肠道菌群转化对解毒祛瘀滋阴方药效没有影响。（）比较MRL/lpr小鼠分别经糖皮质激素和解毒祛瘀滋阴方治疗8周后的肠道菌群变化，结果显示相比于醋酸泼尼松，解毒祛瘀滋阴方能显著上调肠道菌群多样性，Odoribacter和Ruminococcus等有益菌丰度，从而利于狼疮病情缓解。在上述研究结果的基础上，可以得出以下结论：肠道菌群状态可影响狼疮病情及解毒祛瘀滋阴方的疗效，且与肠上皮细胞TLR9表达密切相关；然而肠道菌群转化对解毒祛瘀滋阴方调控TLR9及下游基因表达影响不显著。