1,25-(OH)2D3诱导耐受性树突状细胞(DC)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的作用及机制

Multiple sclerosis is a common central nervos system(CNS) demyelinating disease,which is one of the marjor disease causing young disability and lack of efficient method of specific immunetherapy ，our study aim to explore specific immunotherapy of multiple sclerosis. In this study, we establish mice experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) animal model,then splenic dendritic cells are seperated from EAE mice.In vitro,dedritic cells are culutured with 1,25-dihydroxyvitamin D3 to induce tolerogenic dendritic cells. The phenotype and cytokines of tolerogenic DCs are well studied. To investigate whether 1,25-dihydroxyvitamin D3 induced tolerogenic DCs have the ablity to ameliorate EAE , the tolerogenic DCs are intravenous injected into EAE mice.Further study on the effect of tolerogenic DCs on the CD4+ CD25+ regulatory T cells, CD8+ CD28- inhibitory T cells, T cell proliferation and apoptosis and Th1/Th2 cytokines secretion are well conducted, so as to clarify the therapy mechanism of the tolerogenic DCs. This study is supposed to provide new method and the theoretical basis for the treatment of multiple sclerosis.

多发性硬化（MS）是中枢神经系统常见的脱髓鞘疾病，是青壮年致残的主要原因之一，目前尚缺乏有效的特异性免疫治疗手段。实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是MS的经典动物模型，该研究拟采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）及完全弗氏佐剂建立EAE模型，分离发病期EAE小鼠脾脏树突状细胞（DC），在体外应用1,25-二羟维生素D3诱导这些DC成为耐受性DC，研究其细胞因子的分泌和细胞表面分子表型，并将这些耐受性DC回输给已经发病的EAE小鼠，观察1,25-二羟维生素D3处理的耐受性DC对EAE的治疗作用。并进一步研究其对CD4+CD25+调节性T细胞、CD8+CD28-抑制性T细胞、T细胞增生和凋亡、Th1/Th2细胞因子分泌的影响，从而阐明1,25-二羟维生素D3处理的DC对EAE治疗作用的机理，为耐受性DC特异性治疗MS提供新的方法和理论依据。

多发性硬化（multiple sclerosis, MS）是以中枢神经系统（central nervous system, CNS）白质局灶性髓鞘脱失为主要病理特点的自身免疫性疾病。MS在全世界共有数百万人受累，但目前该疾病尚无特异性的免疫疗法，因此寻找特异性免疫方法治疗MS是亟待解决的问题。. 实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）是MS的经典动物模型，其临床特点及病理特征与MS极为相似，故EAE被广泛应用于MS发病机制及治疗的研究。. 树突状细胞（dendritic cells, DC）是体内最重要的专职抗原提呈细胞（antigen presenting cells, APCs）。在MS发病过程中，抗原被APCs摄取并识别，进而引起自身反应性T细胞的活化，导致CNS炎症、髓鞘脱失和轴突破坏等病理改变。除启动免疫应答外，DC还能促进并维持免疫耐受。利用DC维持免疫耐受的特性，可为MS/EAE的特异性治疗寻找新的靶点。. 研究表明维生素D是引起MS的危险因素之一。但长期服用治疗剂量的维生素D会引起许多副作用，因此直接应用维生素D治疗MS是不可行的。因此我们应用1,25-(OH)2D3诱导出耐受性DC（VD3-DC），并将其回输至EAE小鼠体内，探究其对EAE小鼠的治疗作用及机制。我们发现VD3-DC能够显著地降低EAE小鼠的临床评分并延迟发病时间。脊髓切片显示VD3-DC治疗组小鼠脊髓损伤较轻。除此之外，我们发现VD3-DC回输后能抑制脊髓中Th1和Th17细胞的浸润，增加脾脏中Treg(CD4+CD25+Foxp3+)、Tr1(CD4+IL-10+)和Breg（CD19+CD5+CD1d+）的比例，这可能是VD3-DC对EAE的治疗机制之一。但同时我们还发现VD3-DC回输后脾脏中Th1、Th17细胞比例增高，并且EAE小鼠血清中致炎性细胞因子和IgG的分泌量也较对照组有所增高。因此我们推断：VD3-DC并非通过减弱外周的炎症反应来抑制EAE小鼠的发病，而是通过提高外周Treg、Tr1、Breg的比例和抑制外周Th1、Th17细胞向中枢迁移来减轻EAE小鼠的症状的。我们的研究探索了诱导耐受性DC的新方法，为临床应用耐受性DC治疗MS提供了新的方法和理论依据。