破痞去滞蒙药特穆日-敖日阳古抗肿瘤活性成分及其构效关系研究

蒙药材特穆日-敖日阳古为毛茛科植物芹叶铁线莲Clematis aethusifolia Turcz.的干燥带花叶枝条。具破痞，燥"协日乌素"等功效，是蒙医临床用于治疗肿瘤及其相关疾病的10种主要药材之一，被卫生部药品标准作为常用蒙药材收载。然而，对该药材及其原植物化学成分和生物活性的研究未见报道，特别是针对其抗肿瘤活性的研究更是空白。本课题拟用活性追踪法锁定该药材细胞毒活性部位，用正反相柱色谱、制备型HPLC等方法进行分离精制得到单体化合物，通过核磁共振、质谱等光谱解析手段确定其结构，明确该药材所含的主要化学成分，并从中筛选具有抗肿瘤活性的化合物，特别是新化合物。该研究一方面能填补蒙药材特穆日-敖日阳古及其原植物化学成分的国内外研究空白；另一方面通过对该药材抗肿瘤活性的研究，以期阐明其功效主治的物质基础，为抗肿瘤蒙药新药的研发提供先导物或候选物，为制定该药材的质控标准提供实验依据。

蒙药材特穆日-敖日阳古又名细叶铁线莲，为毛茛科植物芹叶铁线莲Clematis aethusifolia Turcz.的干燥带花叶枝条。具破痞，燥“协日乌素”等功效，是蒙医临床用于治疗肿瘤及其相关疾病的主要药材之一，被卫生部药品标准作为常用蒙药材收载。本课题采用活性追踪法锁定该药材细胞毒活性部位，用正反相柱色谱、制备型HPLC等方法进行分离精制，通过NMR、MS等解析手段确定结构，鉴定32个化合物（1-32，化合物结构见图1），其中2个新化合物（19，31），7个属内首分，其他化合物均为种内首分。采用CCK-8法测定了全部32个单体化合物对五种临床常见的癌细胞系人肺癌细胞系A549，人黑色素瘤细胞系A-375，人结直肠腺癌细胞系HCT-15，人卵巢癌细胞系SK-OV-3，人中枢神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y的细胞毒活性。结果表明，化合物1，4，29，32显示对A549不同程度的生长抑制作用；化合物1，4，9，14，27-30，32显示对A-375的生长抑制作用；化合物2，4，15，27，32显示对HCT-15的生长抑制作用；化合物1，2，4，5，14，32显示对SK-OV-3的生长抑制作用；化合物1-3，5，8，16，21，29，32显示对SH-SY5Y的生长抑制作用。以上化合物经3D-QSAR辅助构效关系分析软件分析，初步阐明其抑制五种癌细胞系作用的量效关系和构效关系。除了完成预期研究任务外，课题组还完成了以下计划外工作：对蒙药材特穆日-敖日阳古进行了本草考证，总结了其药用植物品种，资源分布，地区用药和临床常用方剂；通过对该药材品种整理和质量研究，建立了包括性状鉴别，显微鉴别，薄层鉴别和HPLC含量等质量标准鉴别项；采用FRAP三价铁离子还原实验测定化合物的抗氧化能力，其中化合物8，9有明显的抗氧化活性；测定化合物对大鼠神经鞘细胞株BV2细胞释放炎症介质NO的抑制作用，其中化合物5显示明显的抗炎活性。对蒙药材特穆日-敖日阳古的两种同属代用品黄花铁线莲和棉团铁线莲进行活性追踪分离，共鉴定13个化合物。其中，黄花铁线莲中分离鉴定9个化合物(1，5，8，9，10，28，33，34，35），均为种内首分；棉团铁线莲中分离鉴定4个化合物（28，36-38），均为种内首分（化合物结构见图1）。以上部分化合物显示不同程度的肿瘤细胞毒、抗炎、抗氧化活性。