基于遗传特异性、化学亲缘学和药效物质基础的蒙药阿格希日嘎道地性研究

Mongolian medicine Agsirga is the dried roots and rhizomes of Veratrum nigrum L, commonly used in emetic medicine to treat "sheila" disease, dyspepsia disease and tummor, etc. Its original use is Inner Mongolia wild veratrum, but replace it into the homologous plants traditional Chinese medicine Veratrum recent years, and use Chinese medicine Veratrum standards. In the preliminary work, we found Inner Mongolia wild veratrum and traditional Chinese medicine Veratrum are different in microscopic structure, chemical constituents and toxicity, we cannot unified quality standards of these two plants, so we make initial assumptions of genuineness. In the project, the genetic specificity analysis ISSR would be performed by using molecular identification technology; HPLC fingerprint to study chemical affinity; alkaloids as index constituents to analyze contents difference to establish authentic resources evaluation system of Veratri nigri radix et rhizoma. Choose genuine medicinal materials Veratri nigri radix et rhizome to separate, identify chemical constituents and detect cytotoxic activities to clear exactly effective components of toxicity；serum pharmaceutical chemistry method would be used to analyze and characterize the blood transitional components to lock the efficacy and toxicity substances; establish vitro chemical composition and blood transitional components UPLC-MS rapid identification method, improve the quality of its evaluation system, clear the genuine medicinal characteristic. This is the first study introduces the concept of authentic Mongolian medicine and establish evaluation system, Provide ideas and methodology for related research about Mongolian medicine quality standard and resource research.

蒙药阿格希日嘎为百合科植物藜芦Veratrum nigrum L.的干燥根及根茎，具催吐、泻下功效，用于治疗“希拉”病、食积、痞积等。原用内蒙野生种，近年以内地栽培品种中药藜芦替代，并沿用其标准。课题组研究发现，内蒙野生阿格希日嘎与中药藜芦在显微特征、化学成分和毒性诸方面差异显著，无法统一质量标准，引申出该药材道地性概念。本课题拟采用ISSR技术分析遗传特异性；HPLC指纹图谱研究化学亲缘性；生物碱指标比较含量差异性，以建立该药材道地资源评价体系。 体外提取、分离该道地药材主要成分，鉴定结构并检测细胞毒活性，明确致毒及泻痞药效成分；血清药化方法分析、表征血中移行成分，锁定毒性成分和药效物质；建立体外化学成分和血中移行成分UPLC-MS快速鉴定方法，完善质量评价体系，明确该药材的道地性特征。该研究首次引入蒙药道地性概念，并建立相关评价体系，为蒙药质量标准制定和资源研究提供新的思路和方法论。

蒙药阿格希日嘎为百合科植物藜芦 Veratrum nigrum L.的干燥根及根茎，具催吐泻下功效，用于治疗“希拉”病、食积、痞积等。原采用内蒙野生藜芦，近年以同源植物内地栽培藜芦即中药藜芦替代，并沿用其标准。研究发现，内蒙野生阿格希日嘎与中药藜芦在显微特征、化学成分和毒性诸方面差异显著，无法统一质量标准，引申出该药材道地性概念。.药效物质基础研究：⑴化学成分研究，从阿格希日嘎中分离并鉴定了55个单体化合物， 4个为新化合物其中4个新化合物，（4,6-二甲氧基-5’-羟基-2-芳基苯并呋喃-3’-O-β-D-葡萄糖(1)，6-羟基-3’,5’-二甲氧基-2-芳基苯并呋喃-4-O-β-D-葡萄糖(2)，6-羟基-3’,5’-二甲氧基-2-芳基苯并呋喃-7-O-β-D-葡萄糖(3)，6-羟基-3’,5’-二甲氧基-2-芳基苯并呋喃(4)），其中28个化合物为藜芦属内首次分离。⑵体外化学成分析与质量评价，建立了藜芦甾体生物碱类和茋类成分的HPLC指纹图谱测定方法、HPLC-MS/MS分析鉴定方法。⑶采基于ISSR 的阿格希日嘎遗传多样性研究，建立与优化藜芦ISSR-PCR反应体系，了解其遗传多样性与其基因组进化的分类体系、探寻其遗传多样性和药用价值的相关性，发掘藜芦道地产区，并指导藜芦的良种选育及品种鉴定。.生物活性研究：（1）采用CCK8 法检测其对 5 种常见癌细胞系（人肺癌细胞系 A549、人乳腺癌细胞系 MDA-MB-231、人肝癌细胞系 HepG2、人神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5Y、.人结直肠腺癌细胞系 HCT-15）的生长抑制作用，发现其中9个化合物均能不同程度抑制癌细胞的增殖。（2）采用了 Griess 法和 ELISA 法检测藜芦单体化合物中12个化合物对 LPS 诱导的 RAW264.7细胞中炎性介质 NO、炎性细胞因子 TNF-α、IL-1β 和 IL-6 等分泌均有不同程度的影响。⑶采用 Real-time PCR法和Western-Blot 法，发现通过抑制i NOS、TNF-α 和 IL-6 mRNA 的表达和抑制 NF- κB 和 MAPK 信号通路来发挥抗炎作用。.首次引入蒙药道地性概念，并建立相关评价体系，为解决相关蒙药质量标准制定和资源可持续利用的难题提供思路和方法论。