Numb在肾脏纤维化中的作用及其机制研究

细胞连接的破坏是上皮细胞转分化（EMT）的始动环节，表现为E-钙粘素在细胞膜上的分布减少。研究显示，胞吞作用的增强是E-钙粘素表达减少的重要机制之一。申请者发现，胞吞作用相关蛋白Numb与E-钙粘素相互作用，且共定位于细胞连接处；EMT过程中Numb表达上调；上调Numb表达促进TGF-β诱导的EMT。上述结果提示Numb促进EMT的机制可能是促进E-钙粘素的胞吞作用。本项目拟（1）在稳定表达Numb的细胞内下调胞吞作用核心蛋白a-adaptin的表达，明确胞吞作用在Numb促进EMT中的作用；（2）构建不参与胞吞作用的Numb突变体并检测其对E-钙粘素胞吞作用以及EMT的影响。（3）建立Numb的转基因小鼠，在动物体内验证Numb对EMT以及肾间质纤维化的作用。本研究的成果将揭示Numb促进EMT的分子机制，为确立Numb作为肾脏纤维化的治疗新靶点提供科学依据。

本研究的主要发现是：1.Numb具有促进肾脏纤维化的作用。主要表现为：用siRNA沉默Numb的表达可以促进TGF-beta诱导的EMT，表现为a-SMA, fibronectin和collagen I表达增加。将Numb的siRNA通过尾静脉注射到小鼠肾脏可以显著降低UUO模型中a-SMA, fibronectin和collagen I表达蛋白表达，减轻肾脏纤维化。2. 过表达Numb可以抑制肿瘤细胞生长。通过流式细胞仪分析发现过表达Numb可以引起细胞周期停滞在G2/M期。 哺乳动物的Numb有4个异构体，在食管癌组织中,分子量为72KDa的Numb 异构体p72的表达水平显著降低，与肿瘤的分期以及带瘤生存率等显著相关。