三阴性乳腺癌肿瘤微环境中浸润淋巴细胞的研究

项目前期研究结果提出了"不同类型乳腺癌微环境中浸润淋巴细胞（TILs）的意义不同"研究假说，并获得了预后截然相反的浸润性微乳头状癌（IMPC）和髓样癌(MC）微环境TILs研究数据。本项目将进一步对具有特殊临床意义的三阴性乳腺癌（TNBC）微环境中TILs进行研究，采用组织芯片、免疫磁珠淋巴细胞分离技术、三维立体细胞培养、体外细胞实时动态摄像技术、动物实验、PCR、Western Blot及免疫组织化学染色等方法，特别是通过不同的细胞水平和动物实验模型，体内外模拟"肿瘤微环境"，更客观地分析TILs在TNBC微环境中的功能状态和分子机制；并分析这些TILs与TNBC淋巴结转移、TNM分期和临床治疗及预后等的关系，筛选预后预测标记，提供TNBC 免疫治疗的靶点。因此，本研究将对TNBC这类不能采用激素受体或曲妥珠单抗治疗的乳腺癌的后续治疗，尤其是免疫治疗起到重要的指导作用。

项目组前期研究结果提出了“不同类型乳腺癌微环境中浸润淋巴细胞（TILs）的意义不同”，并获得了预后截然相反的浸润性微乳头状癌（IMPC）和髓样癌（MC）微环境TILs的研究数据（国家自然科学基金，项目编号30600225，已结题）。本项目进一步对具有特殊临床意义的三阴性乳腺癌（TNBC）微环境中的TILs进行研究，以各种非TNBC作为对照，分析TILs在TNBC微环境中的分布和功能状态，并分析这些TILs与TNBC临床病理学特征、临床治疗及预后等的关系，筛选预后预测标记，并提供TNBC 免疫治疗的靶点。. 研究结果主要证实了：1）在TNBC肿瘤组织中的不同部位，浸润免疫细胞的密度不同；且预后好的TNBC（MC）肿瘤上皮内浸润的GrB+淋巴细胞、肿瘤上皮内和肿瘤间质浸润的T-bet+淋巴细胞、以及瘤周浸润的CD68+TAMs，均显著高于预后差的TNBC（IDC）对应部位的浸润密度；2）肿瘤内高CD8+和FOXP3+淋巴细胞浸润与乳腺癌的多种不良的临床病理学特征相关；TNBC中瘤内FOXP3+ Treg的浸润密度最高；3）在接受新辅助化疗后，乳腺癌瘤周较肿瘤内浸润的FOXP3+ Treg细胞对化疗更敏感；化疗后瘤周而非瘤内浸润的FOXP3+ Treg细胞是病理完全缓解（pCR）的独立预测因子，但多因素分析发现瘤内而非瘤周浸润的FOXP3+ Treg细胞是乳腺癌总生存及无进展生存的独立预测指标；4）肿瘤细胞分泌的趋化因子CCL22的表达与乳腺癌瘤内浸润的Foxp3+Tregs细胞呈正相关，且Foxp3+Tregs和CCL22在TNBC中的表达显著高于其他分子类型的乳腺癌；CCL22作为TNBC患者的独立预后指标，可能成为免疫治疗的新靶点；5）保持基因稳定性的关键性激酶ATM在TNBC组织中的表达显著高于非TNBC，但由于TNBC中NK细胞及具有免疫活性的CD8+T的表达较低，尽管ATM的表达显著增高，却不能通过NK细胞/T淋巴细胞介导抗肿瘤的免疫防御功能；6）与非TNBC相比，TNBC癌巢旁间质和远处间质中的IL-17+细胞明显增多，且癌巢间IL-17+细胞的表达与肿瘤的pTNM分期呈正相关。. 因此，本项目相关研究结果将有助于筛选预后预测标记，并可能对TNBC这类目前缺乏有效治疗方案的乳腺癌的后续治疗，尤其是免疫治疗起到重要的指导作用。