跨胎盘RNAi在肠无神经节细胞症中易感基因致畸的研究

肠无神经节细胞症是消化道先天畸形中最具代表性的疾病。多种基因的改变可以导致此疾病的发生，如RET、GDNF、EDNRB、ECE-1等基因，但各种基因是否存在协同作用以及各基因改变导致肠无神经节细胞症发生的量效关系未见报道。RNAi技术是近年来生命科学领域中发展的重要研究技术，跨胎盘RNAi即经过孕鼠尾静脉注射RNAi质粒后，质粒可以跨过胎盘在子代小鼠中发挥靶向沉默功能。本课题组前期的实验结果发现，pSES空载体质粒可以通过孕鼠胎盘，在子代小鼠的肠壁组织上表达红色荧光蛋白，并已成功构建高效靶向沉默RET，GDNF，EDNRB等基因的pSES质粒，采用这些质粒单一或者联合施行跨胎盘的RNAi技术可以探究这些基因改变与肠道神经元发育之间的量效关系，通过基因表达谱芯片和双向凝胶电泳银染蛋白质点的肽质谱指纹图分析技术揭示肠无神经节细胞症发生的分子机制，为此疾病的产前诊断和病因防治提供实验基础。

肠无神经节细胞症是先天畸形中最具有代表性的疾病之一，多种基因的改变可以导致此疾病的发生，如RET、GDNF、EDNRB、ECE-1等基因，但各种基因是否存在协同作用以及各基因改变导致肠无神经节细胞症发生的量效关系未见报道。RNAi技术是近年来生命科学领域中发展的重要研究技术，跨胎盘RNAi即经过孕鼠尾静脉注射RNAi质粒后，质粒可以跨过胎盘在子代小鼠中发挥靶向沉默功能。本项目以肠无神经节细胞症（HSCR）为突破口，采用这些质粒单一或者联合施行跨胎盘的RNAi技术可以探究这些基因改变与肠道神经元发育之间的量效关系。在项目执行过程中，课题组增加了体外实验、斑马鱼生物技术、临床标本分子检测等研究手段多层次、重点、深入研究易感基因（BMP4、RET）在HSCR发生中的作用及分子机制，作为该项目的补充和提高。.在国家自然科学基金的资助下，经过必要的调整，课题组已完成课题申报时内容，获得重要结果如下：1. 成功建立并优化跨胎盘RNAi技术平台，通过下调BMP4成功构建了HSCR动物模型；2. 通过体外细胞实验、斑马鱼模式生物技术、跨胎盘RNAi技术、临床病理分子生物学技术等不同层次揭示了BMP4/2，RET，CXCR4在HSCR发生中的作用及可能的机制；3. 完成了论文发表及研究生培养计划。在本项目资助下完成SCI论文6篇，发表1篇。完成中文核心期刊论文4篇，发表及录用3篇。研究内容在国际会议上进行交流3次、国内会议6次。完成博士研究生培养3名、硕士研究生6名。.本项目首次在国内成功建立并优化跨胎盘RNAi技术平台，为先天发育畸形的研究提供了简单、高效、可控的技术手段，并证实BMP4/2，RET，CXCR4在HSCR发生中的作用，初步揭示肠无神经节细胞症发生的分子机制，为此疾病的产前诊断和病因防治提供实验基础。