艾灸对溃疡性结肠炎结肠黏膜持续炎症的控制作用及其机制研究

TLRs/NF-κB通路异常激活以及相关miRNAs表达异常是导致溃疡性结肠炎(UC)持续炎症的关键环节之一，本项目以此为切入点，应用组织学、分子生物学和生物信息学等技术与方法，从该通路中主要正负调节因子TNF-α、IL-lβ和Tollip、PPARγ，正负调控基因miR-155、miR-16和miR-125b、miR-192，以及UC相关miRNAs差异表达角度，探讨TLRs/NF-κB通路正负调节因子和正负调控基因的表达异常,以及相关miRNAs在UC中发病中的作用，并研究不同灸法对其的干预机制.从临床与动物实验研究两方面证实, 艾灸可能是通过调节TLRs/NF-κB通路的正负调节因子以及正负调控基因表达异常，调控UC相关miRNAs表达，抑制TLRs/NF-κB通路的异常激活，有效控制UC结肠黏膜持续炎症，以达防治UC之目的。

1、采用免疫学方法加局部刺激制备实验性溃疡性结肠炎（UC）大鼠模型。观察艾灸疗法对UC大鼠TLRs/NF-κB信号转导通路正负反馈调节因子的影响。研究发现：1）隔药灸和隔姜灸可以降低UC大鼠结肠组织TNF-α、IL-1β、NF-κBp65、Iκκ及IκB α的mRNA的表达，下调了IL-1β、TNF-α、p-iκB、p-NFκB蛋白的表达，上调Tollip蛋白表达，提示灸法治疗UC及其慢性炎症可能是通过TLRs/NF-κB信号通路起作用的。2）隔药灸和隔姜灸均可降低P53、P16的mRNA表达水平，下调P53蛋白表达，提示UC慢性持续性炎症与P53和P16相关，艾灸能通过抑制P53、P16缓解慢性炎症的作用。3）隔药灸对UC的作用主要与下调了miR-184、miR-3596a、miR-741-3p表达，上调miR-490-5p表达相关。隔姜灸对UC的作用主要与下调了miR-324-5p、miR-20a-5p和miR-184表达，上调了 miR-128-3p和miR-204-3p表达相关，提示不同灸法对UC效应与下调了miR-184的表达相关。.2、从临床上观察不同灸法对UC患者的疗效评价及对TLRs/NF-κB信号通路的影响。研究发现：1）UC患者、CRC患者与健康人的结肠黏膜差异的miRNAs表达谱，提示miRNA参与UC和CRC疾病发生、发展。2）从中医证型疗效、症状评分和组织病理等方面评价不同灸法对UC的疗效，提示艾灸能有效缓解UC的症状。3）基于UC是艾灸的有效病症，观察不同灸法对TLRs/NF-κB信号通路的影响。隔药灸和隔姜灸均能下调NF-κB p65、Iκκ β的mRNA表达，均能上调Tollip、PPARγ蛋白表达；隔药灸上调IκB α、Tollip、PPARγ的mRNA表达，下调NF-κB p65、Iκκ β蛋白表达，其中IκBα蛋白仅被隔药灸上调；不同灸法治疗后均可下调TNF-α、IL-1β、P53、P16蛋白表达，提示艾灸能通过调节TLRs/NF-κB信号通路控制UC肠道的慢性炎症。4）隔药灸和隔姜灸治疗后上调了UC结肠miR-155、miR-125b的表达，下调了miR-16、miR-146表达，提示艾灸对UC持续性炎症的缓解作用与调节了miRNAs表达密切相关。