EV71病毒与RD细胞膜受体蛋白相互作用研究

本课题利用功能蛋白质组学技术研究肠道病毒71型（EV71病毒）与人横纹肌肉瘤细胞（RD细胞）相互关系：1、将EV71病毒大量培养，纯化病毒制备亲和纯化柱，获取RD细胞膜受体，通过质谱分析技术、基因工程技术，建立细胞外膜受体候选蛋白库；2、将病毒进行双向电泳，结合上细胞膜受体蛋白酶标记物，分析两者的作用位点，利用基因工程技术构建EV71病毒外壳蛋白库；3、在上述基础上，通过免疫沉淀技术，确定EV71病毒与RD细胞受体作用蛋白，制备相关重要蛋白的单克隆抗体；4、通过细胞中和实验、抗体免疫竞争抑制试验确认并建立EV71病毒外衣壳蛋白库、RD细胞外膜受体蛋白库，及能阻断病毒侵染细胞的抗体库。通过本课题的实施将深入了解EV71病毒致细胞病变的机制，研究出细胞受体蛋白与EV71病毒相互作用的图谱，将有助于EV71病毒疫苗靶位蛋白的选择，有利于治疗性抗体的研究，并且有助于特异性临床诊断技术的建立。

本课题采用蛋白组学技术及分子免疫学技术研究EV71病毒与RD细胞膜蛋白的相互作用关系，并建立和完善EV71病毒的抗体诊断技术，成果如下：1、RD细胞膜蛋白SLP-2蛋白与EV71病毒VP1蛋白反应，并通过免疫沉淀实验进行验证；2、通过免疫共沉淀技术发现RD细胞上有4个蛋白与EV71病毒结合，其中有2个蛋白与far-western实验结果相符；3、建立2种IgM抗体诊断方法，发现VP1蛋白标识法可解决EV71病毒临床IgM抗体诊断的假阳性问题，并指出VP3蛋白是造成EV71病毒IgM抗体假阳的原因。4、建立EV71病毒IgG抗体检测方法，并对广州地区儿童抗体免疫水平进行调查研究。本课题在执行期间发表了5篇核心期刊文章，培养了2名医学硕士。