肝脏驻留性记忆T细胞在自身免疫性胆管炎中的作用

Primary biliary cholangitis (PBC) is a chronic cholestatic autoimmune liver disease triggered by immune attack on intrahepatic small bile ducts. So far the mechanisms of immune imbalance and liver-specific injury during PBC still remain unclear. Tissue resident memory T cell (Trm cells) is a group of memory T cells that express CD69 and are resident in tissues but do not reenter the circulation. We found greatly increased percent and number of hepatic CD4+ Trm cells and CD8+ Trm cells that were resident in liver sinusoid, and the phenotype of these cells were changed. We will confirm the migratory properties of liver Trm cells by immunofluorescence and parabiosis. We will confirm the function and differentiation pathways of liver Trm cells by adoptive transfer experiment and high-throughput RNA sequencing. And we will get CXCR3 or CXCR6 deficient PBC model mice by crossbreeding. Using these deficient mice, we will study the role of different chemokines in PBC symptoms and differentiation, migration, function of liver Trm cells by flow cytometry, H&E staining, qPCR. These experimental results will provide theory basis for PBC treatment plan by targeting liver Trm cells.

原发性胆汁性胆管炎（PBC）是一种由于免疫系统对自身肝内小胆管进行攻击而引起的慢性胆汁淤积性自身免疫性肝脏疾病。目前对于该疾病免疫失衡的原因以及特异性肝脏损伤的机制仍不清楚。组织驻留性记忆T细胞（Trm细胞）是一群表达CD69、驻留于组织中不随循环系统迁移的记忆T细胞。我们发现PBC模型鼠的肝脏中CD4+ Trm细胞和CD8+ Trm细胞的比例和数目均大量增高，能够驻留在肝窦中，并且其表型发生改变。我们将利用免疫荧光、连体共生等实验来确认肝脏Trm细胞的迁移特性，通过过继转输、高通量RNA测序等实验来确认肝脏Trm细胞的功能和分化途径。我们将杂交得到CXCR3和CXCR6缺陷的PBC模型鼠。利用这些小鼠，我们通过流式细胞术、H&E染色、qPCR等实验研究不同趋化因子对于PBC症状和肝脏Trm细胞分化、迁移、功能的影响。这些实验结果将为针对肝脏Trm细胞的PBC治疗方案提供理论依据。

原发性胆汁性胆管炎（PBC）是一种肝脏特异的自身免疫性疾病，多种免疫细胞在门脉浸润导致小胆管损伤和胆汁淤积，进一步导致肝脏纤维化，肝硬化，甚至肝衰竭。组织驻留性记忆CD8+ T细胞（CD8+ Trm细胞）在多种自身免疫病、感染、肿瘤中发挥重要作用。我们利用自身免疫性胆管炎模型动物IL-12p40(-/-)IL-2Rα(-/-)小鼠，并结合临床样本对CD8+ Trm细胞进行深入探究。我们利用流式细胞术、转录组测序、单细胞测序、免疫组化等实验，证明了PBC模型鼠的肝脏CD8+ Trm细胞高表达驻留性分子、杀伤性分子和细胞因子，应是主要的致病性T细胞。我们也确认了肝脏CD8+ Trm细胞也可以进一步分为三种不同亚群，不同亚群有着不同的表型，但具体功能仍需进一步确定。我们发现IFN-γ促进了CD8+ Trm细胞的形成并加重了PBC疾病，而CXCR3起到负调作用。我们发现了该模型小鼠自发干燥综合征，并证明了CD8+ Trm细胞是主要的致病细胞。最重要的是，我们发现免疫检查点分子在CD8+ Trm细胞中高表达，提示了免疫检查点分子在PBC的发生和发展过程中发挥重要的作用，其中4-1BB/4-1BBL通路的作用及作为PBC治疗新靶点的可能性有待进一步研究。