HPV L2抗原改造及其高效靶向FcγR的基因工程抗体疫苗的应用基础研究

人乳头瘤病毒（HPV）次要外壳蛋白L2免疫原性弱，诱发产生保护性抗体水平低，交叉保护范围远不能满足适合我国国情的宫颈癌预防性疫苗的要求。本研究拟从我国优势高危型HPV18、-58、-52及-33 L2 N端多肽中筛选获得免疫优势表位，从上述本研究发现的表位及目前已明确的HPV16免疫优势表位中优选几种诱发中和及交叉中和抗体能力都好的表位，进行优势整合改造，按一定规律串联排列，并融合一个通用型辅助性T淋巴细胞表位，将改造获得的新型L2抗原展示在对FcγR具有高亲和活性的基因工程改造抗体上，以期高效呈递L2多表位抗原，构建L2多表位抗原化基因工程改造抗体蛋白疫苗，免疫后诱发的抗体可望中和至少包括我国多种高感染率HPV，预防宫颈癌效率高，成本低，目前未见有相关报道。

为了强化人乳头瘤病毒(HPV)次要外壳蛋白L2保守表位的免疫活性，本研究发现了我国优势高危型HPV18，58/52，33 L2的主要交叉中和表位，构建了含有不同L2多表位的改造Fc融合蛋白，研究发现含3个HPV16 L2交叉中和表位的Fc融合蛋白（E3R4）可有效表面展示L2表位，并可通过FcγR介导靶向APC细胞；HPV假病毒中和活性分析显示，E3R4免疫血清可中和HPV16，还可交叉可中和我国其它绝大多数优势流行的嗜粘膜组的高危型及低危型HPV,同时交叉中和嗜皮肤组HPV5。E3R4免疫小鼠可获得持久的抗HPV16，11及5型假病毒攻击的保护活性。此外，研究发现层析法纯化获得的纯度高HPV58 L1病毒样颗粒（VLP）单独免疫或与HPV18及16 VLP混合免疫，可诱发产生持久性的HPV58中和抗体。还发现改造后的霍乱毒素亚单位与IgG的免疫复合物协同HPV16VLP鼻粘膜免疫可诱发高效持久的特异性中和抗体及粘膜免疫。本研究发现的我国多种高危型HPVL2交叉中和抗体表位可望应用于广谱疫苗的研究，获得的E3R4融合蛋白疫苗可望同时预防我国多种优势流行HPV病毒株诱发的宫颈癌及尖锐湿疣，获得的HPV58 VLP具有进一步的研发前景，研究发现的CTA1-DD/IgG可作为HPV疫苗的粘膜佐剂。