moesin及其磷酸化与CD44相互作用影响新生血管的成熟

Excessive angiogenesis, as well as neovessel immaturation are important characteristics of various pathological processes such as the atherosclerosis and proliferative diabetic retinopathy. Our previous studies have shown that the phosphorylation of ERM protein moesin can promote angiogenesis, accompanying with obvious neovessel immaturation. Advanced glycation endproducts (AGEs) can lead to excessive angiogenesis by phosphorylating moesin. This proposal will elucidate the effects of moesin and its phosphorylation on clustering CD44 in regulation of expression and cellular distribution of VE-cadherin in maturity of neovessel. This proposal will investigate the effect of interaction of moesin/p-moesin and CD44 on vascular pericyte coverage and the formation of heterogeneou adherent junction between endothelial cell and pericytes, as well as the formation of basement membrane in neovessels. This proposal will also explore the characteristics and mechanism of AGE-mediated neovessel immaturation by using cytologic, particularly histologic three-dimensional culture techniques. This study aims to explore the mechanisms of neovessel immaturation in pathological angiogenesis, and to prove that AGEs could induce excessive neovascularization, as well as insufficient neovessel maturation by phosphorylating ERM protein moesin.

病理性血管新生具有血管新生过度但成熟不足的特征。本实验室已有的研究证明ERM蛋白moesin的过度磷酸化可促进血管新生，并伴随明显的成熟不足；晚期糖基化终产物（AGEs）通过磷酸化moesin而导致血管新生过度；文献和预实验提示磷酸化moesin对CD44有明显簇集作用。课题将在细胞、组织和整体水平，从moesin及其磷酸化与CD44相互作用的角度，观察moesin及其磷酸化与CD44相互作用对内皮细胞钙依赖性粘附素（VE-cadherin）表达以及细胞间粘附连接形成的影响和机制；观察moesin及其磷酸化与CD44相互作用对内皮细胞募集周细胞、周细胞在新生血管的覆盖率、以及基底膜形成的影响，从而探讨病理性血管新生成熟不足的机制，并证明糖尿病血管并发症的发生过程中，AGEs通过引起moesin的磷酸化而簇集CD44，导致新生血管的成熟不足。

病理性血管新生具有血管新生过度但成熟不足的特征，在多种疾病发生发展过程中起重要作用。本项目研究利用小鼠视网膜和主动脉环新生血管观察、周细胞和内皮细胞共培养等手段，证明：.一、ERM蛋白moesin的过度磷酸化可促进血管新生，并伴随新生血管成熟不足等变化，如粘附连接结构破坏，内皮细胞分布紊乱；周细胞覆盖减少；基底膜胶原蛋白IV（Col-IV）分布不均等。.二、Moesin本身通过正调节转录因子KLF4的表达维持VE-cadherin的表达，促进内皮细胞间粘附连接的形成。在AGEs介导的糖尿病病理状态下，moesinT558位点的磷酸化促使其与F-actin结合，使细胞中应力纤维形成增加，促使胞膜VE-cadherin移位入浆，导致VE-cadherin在胞膜、胞浆分布异常，影响内皮细胞间粘附连接的形成和新生血管成熟不足。结果显示moesin及其磷酸化状态在血管稳态调节中的双重作用。晚期糖基化终产物（AGEs）可以在T558位磷酸化激活moesin，导致新生血管粘附连接结构失稳，是新生血管成熟不足的特征之一。.三、AGEs可通过激活RhoA-ROCK途径介导血管周细胞moesin T558位点的磷酸化，促进p-moesin和CD44蛋白的相互作用和CD44的簇集，并促进F-actin应力纤维的重构，导致周细胞发生收缩和迁移，使新生血管周细胞覆盖率降低，内皮与周细胞之间的异质性粘附连接结构破坏；也导致Col-IV的分布异常，新生血管基底膜厚薄不均，加重新生血管的成熟不足.四、AGEs诱导的moesin磷酸化还促进内皮细胞和周细胞CD44的表达，其表达调节机制可能与TCF4的激活有关。本项目的后续研究，将继续证明β-catenin/TCF4信号通路介导血管内皮和周细胞CD44表达的增加；CD44表达的增加和激活可降低新生血管周细胞覆盖率，并可通过与MMP-9的相互作用，导致新生血管Col-IV的降解，进一步影响新生血管的成熟。.本项目的研究结果，揭示了moesin及其磷酸化状态在新生血管稳态中的双重作用；并证明糖尿病血管并发症发生过程中，AGEs的蓄积可通过磷酸化moesin等机制，导致视网膜等组织血管过度新生但成熟不足，可能是糖尿病微血管并发症发生的重要机制。.本项目发表标注论文10篇，其中SCI 收录论文9篇，中文核心期刊1篇。尚有结果在总结和撰稿中。