TGF-β3与牙髓干细胞在动物面神经损伤修复中的应用研究

面神经损伤后重建的治疗效果是基础和临床的研究热点。转化生长因子(TGF-β)是一个多功能的生长因子超家族，与神经元、神经纤维、雪旺氏细胞相互作用，调节受损神经的修复与再生。牙髓干细胞（DPSCs）是一种在外源性因子的刺激下能向多种细胞成分转化的成体干细胞，近来研究证实可定向分化为神经细胞。本研究利用建立面神经损伤动物模型，将TGF-β3和DPSCs注入神经断端，通过对神经生长特异性标志物nestin、GFAP、S100β蛋白和小GTP 结合蛋白 TC10在不同时期表达的检测，探索TGF-β3在面神经损伤修复中的作用和牙髓干细胞向神经细胞定向分化的机制。结合神经电生理检测和图像分析技术，临床观察神经功能恢复情况，评价在TGF-β3和牙髓干细胞治疗面神经损伤的修复效果，为临床面神经损伤后的修复治疗提供新的、科学的治疗方法，为今后临床治疗面神经损伤提供新的研究视角。

一、项目的完成情况及取得成果概述.1.成功地完成了牙髓干细胞的体外分离、培养和鉴定：本研究从新西兰幼兔前牙及磨牙牙髓组织中分离DPSCs进行体外培养，并对DPSCs的增殖能力和生物学特性进行鉴定。结果表明DPSCs可作为种子细胞，为神经组织工程选择种子细胞提供依据，为其进一步用于面神经缺损的修复治疗提供基础。.2.完成了面神经损伤动物模型的建立及评价：应用节段性切除面神经5mm，任其回缩，造成7mm神经缺损的的方法制作兔面神经损伤动物模型，于建模后7d、14d分别行光镜、电镜组织病理学检测，结合行为学观察、神经电生理检测技术对面神经上颊支缺损模型进行评价。结果显示：采用兔面神经上颊支离断建立面神经缺损模型，获得的模型性质稳定、可重复性好、术后动物存活率和模型成功率高，具有进一步的推广意义，是研究面神经损伤与再生修复的良好模型。.3. 初步证明TGF-β3和牙髓干细胞联合干预可显著促进面神经缺损后的修复。本实验从①动物行为学（触须细微的颤搐、节律性拂动、啜唇、耸胡须动作及有无面瘫等表现）、②神经电生理、③HE染色、④免疫组化、⑤图像分析、 ⑥分子生物学方面较全面评价TGF-β3和牙髓干细胞联合应用对面神经损伤的修复效果，研究结果提示：与对照组比较，移植的神经干细胞可促进面神经损伤功能的修复。.4．国内医学期刊发表论文5篇；，其中2篇核心期刊。.5. 培养博士生1名，研究生4名，其中1名博士生和1名研究生已顺利毕业，3名研究生在读，实验数据正在整理中，拟定于今年5月份答辩。.6．在目前研究的基础上，准备申请下一国家自然科学基金项目，继续进行TGF-β3和牙髓干细胞联合治疗面神经缺损疗效的分子机制探索和研究，如：信号转到通路、蛋白质功能等方面的探索和研究，后续研究宜进一步加大样本量验证本实验结果，同时进一步从分子水平上去探讨DPSCs修复面神经损伤的具体机制，为临床面神经损伤后的修复治疗提供新的、科学的治疗方法，为今后临床治疗面神经损伤提供新的研究视角，具有潜在的临床应用前景。.二、存在的问题.1. 成功地完成了牙髓干细胞的体外分离、培养和鉴定，但是由于DPSCs培养周期长、收获率低，难以建立细胞系，目前评价指标仅能进行综合评价，缺乏特异性。因此，寻找更简便、高效的DPSCs分离培养方法，找出鉴定DPSCs的更多、特异性更高的表面标志物，是我们