干预periostin表达对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞功能的影响

瘢痕疙瘩是一个研究过度纤维化疾病的天然疾病模型。为了揭示创伤愈合和内脏器官纤维化的机理，研究瘢痕疙瘩的关键致病基因及其功能。成骨细胞特异性转录因子2（periostin，简称POSTN）是我们筛选到的瘢痕疙瘩及其成纤维细胞高表达的差异表达基因，其可能是瘢痕疙瘩过度增生侵润生长的关键致病基因。我们拟通过已构建的POSTN小发卡RNA（shRNA）载体和过表达载体，分别转染瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞改变POSTN基因表达量；观察干预该基因表达对转染细胞的增殖、细胞迁移和促血管内皮细胞血管生成功能的影响，观察与上述功能相关联的Akt/PKB、MAPK细胞信号通路活性变化。明确POSTN对瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用，探究其是否为影响创伤愈合和纤维化疾病的致病基因及其机理；了解干预其表达能否逆转瘢痕疙瘩成纤维细胞性质。该结果将对瘢痕疙瘩、内脏器官纤维化疾病病理机理的阐明及诊疗改进有重要意义。

.为了揭示创伤愈合和内脏器官纤维化的机理，研究瘢痕疙瘩（K）的关键致病基因及其功能。成骨细胞特异性因子2（periostin，简称POSTN或PN）是我们筛选到的瘢痕疙瘩及其成纤维细胞（KFb）高表达的差异表达基因。为探究其是否为瘢痕疙瘩过度增生浸润生长的关键致病基因，本项目研究PN对人的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞、脐静脉血管内皮细胞、骨肉瘤U2OS细胞及脂肪干细胞的作用机理。1. 构建干扰PN表达的小发卡RNA（PN shRNA）载体及其慢病毒载体（PN lv-shRNA）。2. 将PN-shRNA及PN lv-shRNA 分别转染骨肉瘤U2OS和KFb细胞；将外源性重组人PN蛋白给予人正常皮肤（NS）成纤维细胞（NFb）、人血管内皮细胞（HUVEC）、人脂肪干细胞（hADSCs），观察PN等相关基因的表达和细胞的增殖、迁移、侵袭及FAK、AKt信号系统的变化。实验结果说明periostin对皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞及其它细胞的功能有很大影响。 3. 通过免疫组化、Western blot和实时定量PCR检测K、NS组织和KFb、NFb及大鼠创面组织中的PN及其相关促血管形成因子VEGF、Ang-1的表达，分析结果PN表达水平和血管密度密切相关。4．通过从Pubmed文献挖掘和生物信息学分析对瘢痕疙瘩、增生性瘢痕(HS)的差异表达基因进行分析，揭示对瘢痕疙瘩和增生性瘢痕有重要作用的相关基因及通路。.上述研究结果说明，Periostin对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞、血管内皮细胞、骨肉瘤U2OS细胞及脂肪干细胞的活力和功能有明显促进作用，其是瘢痕疙瘩形成和创伤愈合过程中关键因子。.本项目完成预期计划。获得国家发明专利2项，共发表文章11篇（其中英文文章2篇），还有1篇英文文章已接收。培养毕业博士研究生2名、硕士研究生3名、在读硕士研究生3名。.