与I型单纯疱疹病毒蛋白VP22互作宿主蛋白的筛选及其生物学功能研究

I型单纯疱疹病毒（HSV-1）是一种在人群中感染较为普遍的病毒，可导致多种疾病，并且存在潜伏感染和再激活，目前还没有疫苗或能完全治愈的药物。VP22是HSV-1病毒颗粒中含量最丰富的皮层蛋白之一，在α疱疹病毒亚科中高度保守,是病毒感染和复制的必需蛋白。VP22具有重要的生物学功能，如与染色质和微管结合，诱导微管重组和细胞间穿梭等。病毒的感染复制依赖于宿主，而病毒蛋白与宿主蛋白的相互作用是病毒感染复制的基础。本研究拟以VP22为诱饵蛋白，利用酵母双杂交技术从人类白细胞cDNA文库中筛选与之相互作用的宿主蛋白；用GST pull-down、免疫共沉淀、荧光共定位等方法进一步验证其相互作用；并通过RNA干扰、过表达与VP22互作的宿主蛋白以及构建VP22缺失/突变病毒等方法研究这些蛋白对相互作用的生物学意义，为进一步阐明VP22在HSV-1感染和复制中的生物学功能以及开发新的药物靶点提供新线索。

HSV-1皮层蛋白VP22由UL49基因编码，是HSV-1复制必需蛋白，VP22在病毒复制过程中的确切功能暂时还不明确，我们制作了抗HSV-1 VP22的抗体，后续的免疫印迹和免疫荧光实验证明了这种重组的VP22抗血清可以特异性的识别HSV-1感染的细胞中的VP22。同时我们用YTH和免疫荧光的方法检测与I型单纯疱疹病毒蛋白VP22互作宿主蛋白，发现RING finger protein 10 (RNF10),WD repeat-containing protein 42A(WDR42A)等多种蛋白可能与HSV-1 VP22相互作用，我们通过免疫荧光发现，VP22可与RNF10、WDR42A共定位，并进一步验证VP22与RNF10、WDR42A的相互作用。.