与弓形虫微线蛋白互作的宿主蛋白的筛选、鉴定及功能研究

弓形虫病是由寄生于多种动物有核细胞内的刚地弓形虫引起的一种全球性人兽共患寄生虫病。尽管弓形虫的研究工作取得了巨大的进展，但由于弓形虫复杂的生活史和有效的免疫逃避机制，人类对弓形虫入侵机制、毒力基础、与宿主的关系等致病的重要环节了解不多，所以迄今为止还缺乏有效的弓形虫病预防和控制方案。弓形虫入侵宿主细胞机制一直是弓形虫病研究的热点。研究表明，弓形虫微线蛋白是弓形虫入侵细胞的关键蛋白，在顶体黏附过程中起着重要作用，但与微线蛋白黏附相关的宿主蛋白仍不清楚，为此本研究拟用弓形虫微线蛋白作为诱饵，与鼠全基因组cDNA文库双杂交，筛选宿主与微线蛋白互作的蛋白，在此基础上，利用免疫共沉淀技术、免疫荧光定位以及抗体阻断试验对其进行功能验证，确定宿主与微线蛋白互作的关键蛋白，从而为弓形虫的黏附机制、分子致病机理、基因工程疫苗研究和药物设计提供理论依据，同时为顶复门寄生虫入侵细胞机制的研究提供新的模型和思路。

弓形虫是一种可以感染人类和多种温血动物的专性细胞内寄生原虫，其具有广泛的宿主范围。该寄生虫如此广泛的宿主范围得益于其成功的入侵宿主细胞和调节宿主信号转导的机制。多种研究表明，弓形虫微线体蛋白是弓形虫入侵细胞的关键蛋白，在黏附宿主细胞和调节宿主信号过程中起着重要作用，但与微线体蛋白黏附相关的宿主蛋白仍不清楚，为此本研究拟用弓形虫微线体蛋白作为诱饵筛选、鉴定与其相互作用的宿主蛋白。利用酵母双杂交技术筛选到了与弓形虫微线体蛋白MIC2整合素A样结构域有相互作用的宿主蛋白2个，与弓形虫微线体蛋白MIC3有相互作用的宿主蛋白8个，没有得到与AMA1相互作用的宿主蛋白。利用多种蛋白质互作技术进行验证证实MIC3可以与宿主的Spata3和DKK2相互作用，并鉴定出了MIC3的EGF结构域是与宿主蛋白互作的关键结构域。上述结果为弓形虫的黏附机制、分子致病机理、基因工程疫苗研究和药物设计提供理论依据，同时为顶复门寄生虫入侵细胞机制的研究提供新的模型和思路。