Th17/Treg免疫在原因不明复发性流产发病机制中的作用之深入研究

In the previous study, we first proposed the maternal-fetal Th17/Treg immune balance which deviated to Treg in normal pregnancy, while unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA) deviated to Th17 cells. With the help of the fund, we found the dysfunction of Th17 cells and macrophage (Mφs) and the disorder of IL-27/IL-23-Th17/Treg signal pathway in URSA patients. The regulation of Tregs on Th17 cells and Mφs decreased in URSA patients, while Tregs from normal pregnancy could regulate the function of Th17 cells and Mφs in URSA patients. Transfusion of pregnancy-induced Tregs decreased the abortion rate caused by Th17 cells. This project, on the premise of intensive previous study, will study the character of Th17/Treg from Foxp3/RORC epigenetic, molecular biology and cell biology aspects, to analyze the feasibility of diagnosis URSA etiology and prognosis by virtue of peripheral blood test and to explore the exact signal pathway through different stimuli including inflammatory factor and hormone. We will use the transfusion of fluorescin-Tregs to mice to ascertain the efficiency and safety of Tregs immunology.

前期研究，我们首次提出母胎Th17/Treg平衡，正常妊娠偏向Treg，而原因不明复发性流产(URSA)偏向Th17。在基金资助下，我们发现URSA患者Th17细胞、巨噬细胞(Mφs)功能异常，IL-27/IL-23-Th17/Treg信号通路异常。URSA患者Tregs调控力降低，而正常早孕妇女Tregs能调控URSA患者Th17细胞、Mφs功能。转输鼠胚胎抗原特异性Tregs降低Th17细胞所致胚胎丢失率。本项目拟从遗传、分子生物及细胞生物学等角度深入研究URSA患者Th17/Treg转录因子Foxp3/RORC表观遗传学变化及功能特点，分析外周血进行URSA病因学诊断及预后判断的可行性。采用抑炎、促炎因子及激素刺激，探讨调控Th17/Treg分化及功能的具体信号通路，深入探讨Th17/Treg免疫耐受机制。利用鼠模型，转输转染荧光蛋白Tregs，确证Tregs免疫治疗的有效性及安全性

原因不明复发性流产被认为与母胎免疫排斥有关，是目前亟待解决的难治性不育症。前期研究中，我们发现Treg/Th17平衡在母胎免疫耐受中发挥重要作用，Treg/Th17失衡与母胎免疫排斥密切相关。原因不明复发性流产患者Treg/Th17失衡偏向Th17，Treg调控Th17、巨噬细胞功能异常。在此基础上，进行了鼠实验和临床实验：1）鼠实验发现经阴道注入rIL-17能降低正常孕鼠蜕膜中Tregs表达，导致流产的发生。交配前经尾静脉注入正常孕鼠的Tregs能降低流产的发生，而交配后注入正常孕鼠的Tregs不能降低流产的发生。2）Treg细胞在胚胎种植期发挥重要免疫耐受作用。妊娠成功患者种植期外周血Tregs表达水平及细胞因子（TGF-β和IL-10）的表达较未孕者明显增加。3）于月经第10,14,28天，检测原因不明复发性流产患者外周血Tregs水平，选择5例Tregs表达明显降低的患者进行夫血Tregs免疫治疗，Treg免疫治疗能提高患者外周血中Tregs的表达，增加妊娠成功率。4）对冷冻胚胎移植的患者，移植前2天宫腔内灌注HCG能增加IVF患者外周血Tregs的比例，提高反复种植失败患者的妊娠成功率。5）采用多普勒超声探讨反复种植失败（RIF）患者子宫动脉血流及其相关因素的特点，发现RIF组子宫动脉血流搏动指数（UAPI）明显高于正常妊娠组，而两组子宫内膜厚度、雌孕激素无明显差异，提示HCG日测定UAPI有助于评价子宫内膜容受性，预测种植率。6）针对高龄未孕妇女卵子质量差的问题研究DHEA预治疗对改善卵子质量的可行性。未服用DHEA组与服用DHEA组两组患者HCG日雌激素，内膜厚度，取卵数，MⅡ卵子数量无明显差异，但2PN率和优胚率，种植率及活产率在DHEA组明显增加，而流产率在DHEA组明显降低。结果提示IVF治疗前对高龄妇女进行DHEA预治疗能够提高妊娠结局。7）深入到原因不明复发性流产配偶的检查，进行男性生殖道的蛋白质组学与基因的研究，发现与不孕相关的睾丸生殖细胞特异性基因、精子突变及功能异常相关的蛋白