炎性相关miRNAs在TNF介导的急性肝衰竭中调控机制的研究

急性肝衰竭发生发展过程中，最核心的关键事件是TNF介导的肝细胞凋亡和坏死，miRNAs作为一种新型免疫调节分子参与并调节天然免疫反应，调控以TNF为代表的炎性细胞因子的表达，提示miRNAs在肝衰竭的免疫发病机制中必将发挥重要的作用。本课题拟建立急性肝衰竭小鼠模型，运用miRNA芯片，Northern-blot及RT-PCR等技术了解急性肝衰竭肝组织miRNAs的表达谱，找出差异表达miRNAs并进行验证，筛选出与肝衰竭发生和发展过程中密切相关的关键miRNAs，探讨这些miRNAs在急性肝衰竭免疫发病机制中的作用和地位；并在体内外导入miRNAs 模拟物及阻抑物以改变其表达，研究miRNAs对肝衰竭肝细胞损伤过程中TNF 产生信号通路中关键分子的调控以及对肝细胞损伤和疾病转归的影响，并找到可能的靶基因，为急性肝衰竭新的免疫发病机制的阐明以及寻找治疗新靶点提供实验依据。

microRNAs在体内较多生理过程中发挥一定作用，如细胞再生、细胞分化以及内环境稳定。microRNAs在稳定肝细胞功能和肝细胞再生中也起到一定作用，如Cheung 等人[1]报道miR-122在非酒精性脂肪肝中的研究。TNF-α在急性肝衰竭中的作用已有较多研究，但是miRNAs在TNF-α介导急性肝衰竭发生机制中的作用还不是很清楚。本研究先从小鼠急性肝衰竭动物模型入手，通过免疫组化及ELISA方法发现小鼠肝脏组织学及血清学细胞因子的变化。然后通过miRNAs 芯片技术检测肝脏组织中 miRNAs 的表达谱，找出差异性表达的炎症相关的miRNAs并进一步验证。并通过生物信息学预测miR-15b、miR-16和miR-21共同作用于BCL2，miR-155 作用于caspase-12。并在体外通过LPS诱导Raw264.7细胞以进一步研究miR-155的来源，并利用miRNA模拟物（ miR-155 mimic）或阻遏物（miR-155 inhibitor）转染小鼠胚胎肝细胞BNLCL2细胞研究miR-155对TNF-a表达的影响。通过我们的研究发现miRNAs（miR-15b、miR-16及miR-155 等）在TNF-α介导急性肝衰竭发生中发挥重要作用，相关miRNAs可以调控TNF介导肝细胞凋亡和坏死，从而导致肝衰竭的形成，这些研究结果可以为进一步了解肝衰竭的发病机制以及研发肝衰竭临床干预措施提供了丰富的实验依据。