基于基因组学的痰湿型PCOS卵巢颗粒细胞标志物筛选及经方干预研究

Based on our first five National Natural Science Fund subject research, starting with phlegm-damp PCOS, non-phlegm-damp PCOS and normal group of patients with IVF-ET granulosa cell, analysis of granulosa cells genetic map regulation network is done panoramically with GO function analysis and bioinformatics pathway enrichment and identification analysis to screen of TCM phlegm-damp infertility genomics markers. Through random parallel control study, phlegm-damp PCOS patients with IVF-ET are selected after having Chinese Medicines. The difference among expression on granulosa cell genomics on the day of oocyte retrieval is analyzed, and then variance of expression on genes among every group is compared. The expectations of this project are looking for the targets of Chinese medicines, applying to clinical diagnosis, treatment, prognoses analysis and drug development, seeking for theoretical breakthrough in the theory of TCM syndrome.

项目在前五项国家自然基金研究基础上，以筛选中医痰湿型不孕症基因组学标志物为目标，以体外受精-胚胎移植技术为平台，以痰湿型、非痰湿型PCOS及因男方因素行试管婴儿女性取卵日卵巢颗粒细胞为切入点，获得以上各组和经典中药干预后的基因组表达谱，对各组颗粒细胞基因表达图谱进行全景式分析，利用GO功能富集分析及生物信息学通路富集并鉴定分析，辨识并确定与痰湿证发生和经方作用机理密切相关的特征性基因；有助于发现痰湿不孕的基因组学标记物，为科学诊断痰湿证、探讨其证候本质提供理论和实验依据，以期应用于临床诊断、治疗、预后分析和药物研发，力争在颗粒细胞基因组学层面丰富发展中医证候学理论。

目的：运用高通量测序技术筛选痰湿型多囊卵巢综合征（PCOS）、非痰湿型PCOS与正常女性卵巢颗粒细胞基因表达谱的差异，并进行功能和通路分析，探讨痰湿型PCOS患者的发病机制。在此基础上，探讨燥湿化痰中药苍附导痰颗粒对痰湿型PCOS患者产生的影响及其疗效作用机制。.方法与结果：1、痰湿组、非痰湿组和正常对照组患者的优质卵率、受精率、优质胚胎率及临床妊娠率比较，正常对照组明显高于痰湿组及非痰湿组。2、痰湿组和正常对照组患者的卵巢颗粒细胞间存在表达差异基因245条（p＜0.05）；其中，痰湿组较正常对照组表达水平上调(FC＞2)的有133条，表达水平下调(FC＜0.5)的有112条。痰湿组和非痰湿组患者的卵巢颗粒细胞间表达差异基因共353条（P＜0.05）；其中，痰湿组较非痰湿组表达水平上调(FC＞2)的有165条，表达水平下调(FC＜0.5)的有188条。表达差异的基因按GO功能注释，主要涉及参与细胞因子活性、细胞增殖、免疫反应、炎症应答、生物合成、细胞凋亡、信号传导等方面；按照KEGG通路分析涉及到多个信号转导通路，包括细胞因子受体相互作用通路、IL-17信号通路、P53信号通路、趋化因子信号通路、TGF信号通路等。3、苍附导痰颗粒治疗组与安慰剂组相比，在痰湿证候积分、HOMA-IR差值、优质卵率、受精率、优质胚胎率上，治疗组均明显优于安慰剂组（P＜0.05）。.结论：1、痰湿型PCOS患者卵巢功能降低乃至生殖障碍的原因之一可能是参与细胞因子活性与生物合成、炎症应答与信号传导等方面的基因异常表达。2、燥湿化痰中药苍附导痰颗粒改善痰湿型PCOS患者生殖功能及妊娠结局的原因之一可能是通过调节有关细胞因子活性与生物合成、炎症应答与信号传导等方面基因的表达，在基因组学层面上为苍附导痰颗粒改善生殖功能提供了理论依据。3、上述结论可以为中医学“痰湿致不孕”以及“燥湿化痰促生殖”经典理论提供基因水平上的科学依据。