miRNA在猪ADSCs定向成脂分化中的作用及机制研究

miRNA是近几年发现的对基因表达进行转录后调控的小分子RNA，研究证实其参与脂肪细胞分化过程调控。为研究猪ADSCs定向成脂分化过程中的miRNA调控事件，本项目拟以实验室已获得的猪ADSCs为材料，运用miRNA芯片检测其体外成脂分化过程miRNA的时序表达，筛选差异表达miRNA，通过miRNA的反义抑制确定显著影响猪ADSCs成脂分化的miRNA；在ADSCs中过表达特定miRNA，通过形态观察以及细胞分化率、标志基因表达和细胞充脂状况等的检测来研究miRNA对猪ADSCs成脂分化过程的影响；通过软件预测、荧光素酶报告基因系统验证和相应预测靶基因蛋白表达水平的检测来确定miRNA实际作用的靶基因。通过以上研究，明确miRNA在猪ADSCs成脂分化中的作用及机制，为进一步揭示猪脂肪细胞分化的分子调节机制奠定基础，为阐释猪脂肪相关肉质性状形成的分子机理提供依据。

为全面理解猪脂肪组织发育过程中miRNA的功能，本项目采用Solexa测序技术鉴定了脂肪组织发育相关的miRNA，并对部分miRNA的表达、功能及作用机制进行了全面分析和验证。得到如下结果：构建了7日龄和240日龄荣昌猪背部皮下脂肪组织小RNA文库，采用Solexa测序技术检测了两个阶段脂肪组织中miRNA的表达谱，鉴定了脂肪组织发育相关miRNA；发现miR-103可以促进脂肪细胞分化；miR-196a促进猪前体脂肪细胞的分化；miR-191通过调节成脂关键基因C/EBPβ抑制猪前体脂肪的成脂的分化；miR-128a通过靶定IRS1抑制脂肪细胞的分化；miR-15a/b通过抑制Foxo1促进猪前体脂肪细胞分化；miR-139-5p通过靶定Notch1与IRS1抑制脂肪细胞的分化。本研究结果为全面理解动物体脂沉积的分子调控机制提供理了新的论依据，也为人类肥胖及相关代谢疾病的防治提供新思路。