猪BMSCs的成脂分化及FSP27蛋白的调控机制

脂肪特异性蛋白27是一种脂肪滴结合蛋白，对细胞脂肪的积累具有重要的调控作用。本研究以猪骨髓间充质干细胞（BMSCs）为成脂分化细胞模型，通过免疫细胞化学、基因转染、定量PCR、酵母双杂交、电泳迁移率变动实验（EMSA）、免疫共沉淀（Co-IP）等方法，系统观察FSP27基因沉默与表达对BMSCs成脂分化、脂肪滴形成、发育及融合的影响，BMSCs成脂分化与FSP27基因表达的时空规律， FSP27基因的启动子元件及转录因子的结合调控，FSP27蛋白与脂肪滴表面结合蛋白、脂肪滴转运和脂肪动员等相关酶蛋白的互作调控等，以解析FSP27基因表达与BMSCs成脂分化及脂肪滴发育调控的动态机制，为猪干细胞成脂分化机制及其肉质改良的分子基础研究提供理论依据。

项目工作按照原计划，在分离猪及模型小鼠MSCs细胞的基础上，建立并完善了成脂细胞模型，系统的完成了猪FSP27与脂肪滴形成、发育及脂肪积累的研究，结果证明：①猪FSP27分子中1-105氨基酸和1-173氨基酸具有脂滴定位，尽管1-106氨基酸定位能力较弱，但必须；②FSP27具有内质网位置功能，先结合到内质网，然后位于脂滴上；③FSP27蛋白具有促脂肪滴融合功能，分子4-238氨基酸可使脂肪滴体积变大，数量减少，形成单室大脂滴；④FSP27蛋白可使脂肪滴的比表面积较少，甘油三脂积累量增加；从而导致脂解相关的酶类在脂滴上的结合减少，脂解能力下降，以致细胞脂肪沉积增加。在完成上述计划内容外，还系统的研究了脂滴相关蛋白LSDP5、脂肪细胞因子Adipose及Resistin的表达、启动子调控以及在细胞分化、线粒体数量及脂肪代谢等方面的功能，研究表明：①C/EBPα可特异与脂滴相关蛋白LSDP5启动子结合并调控其表达；②Adipose 可促进肌细胞分化，而TNFα可通过KLF15-Adipose-MyoG途径抑制肌细胞分化及线粒体数量；③Resistin通过PKC-PKG-p65-PGC-1α途径减少线粒体数量，促进肝脏脂肪积累.培养博士研究生7名（其中毕业5名，在读2名），硕士毕业生26名，培养及引进青年学术骨干3名。国外权威刊物发表论文：其中SCI论文12篇；国内刊物及会议论文摘要24 篇。