健脾清肠方调节PERK-eIF2α/ NF-κB通路治疗溃疡性结肠炎的机制研究

Ulcerative colitis (UC) has seriously affected the health and life-quality of patients. Activating the PERK-eIF2α/NF-κB pathway by excessive endoplasmic reticulum stress (ERS) of intestinal epithelial cells (IEC) may play an important role in development and recurrence of the process of UC. Our previous study indicated that Jian Pi Qing Chang decoction(JPQC) had gained satisfactory outcomes. This project applys DSS induced colitis,IL-10 gene knockout mice, and HT29 cell culture model in vitro , using cell biology and molecular biology research methods, to explore the function of ERS inducing damage in IEC and the development of UC,and to study on the probable mechanism of how JPQC treats UC by regulating the PERK-eIF2a/ NF-κB pathway.Further more,via this project, we could expound the pathological essence of “chronic dysentery” and “inner sore” due to “spleen deficiency with dampness”,in order to enrich the scientific connotation of TCM therapy of UC.

溃疡性结肠炎（UC）严重影响患者的健康和生活质量。肠上皮细胞过度内质网应激（ERS）激活PERK-eIF2α/NF-κB通路，可能是损害肠道黏膜屏障，导致UC发生的重要发病机制。健脾清肠方治疗UC取得较好疗效。本项目以DSS诱导急性结肠炎小鼠模型、IL-10基因敲除慢性结肠炎小鼠模型和体外培养HT29细胞为研究对象，采用细胞和分子生物学等技术，研究PERK-eIF2α/NF-κB通路在过度ERS引起肠上皮细胞损伤和UC形成中的作用，探讨健脾清肠方调节可能通过调节PERK-eIF2α/ NF-κB通路而发挥治疗UC的作用机制，阐明由脾虚夹湿热导致“久痢”和“内疡”的病理实质，丰富中医药治疗UC的科学内涵。

溃疡性结肠炎(UC)属难治性疾病，严重影响患者的健康和生活质量。肠上皮细胞内质网应激(ERS)过度激活PERK-eIF2α/NF-κB通路，可能是损害肠黏膜屏障，导滞UC发生的重要发病机制。本项目构建了DSS诱导的结肠炎小鼠模型，给予健脾清肠方干预治疗；运用系统药理学的方法，对健脾清肠方的药效机制进行系统性的探索；毒胡萝卜素内酯诱导HT29细胞发生ERS，构建Caco2细胞与小鼠骨髓来源巨噬细胞的共培养试验，给予健脾清肠方含药血清干预。观察小鼠一般情况，HE、免疫组织化学法评估健脾清肠方对小鼠结肠组织的病理学改变，透射电镜观察结肠上皮细胞超微结构，ELISA检测结肠组织细胞因子含量，Western blot、RT-PCR、组织免疫荧光染色法检测结肠组织中相关蛋白与基因表达水平。.成功复制DSS诱导的结肠炎小鼠模型，健脾清肠方能够改善模型小鼠的一般情况，减少模型小鼠结肠组织中炎性细胞浸润、隐窝脓肿及溃疡形成等病理学改变，透射电镜可见结肠上皮细胞空泡状结构数目减少，体积变小，内质网网膜腔轻度扩张，形态基本呈膜网状样。系统药理学结果显示，健脾清肠方全方共含有107个候选药物活性成分及170个潜在的药物活性成分相关作用靶点，健脾清肠方治疗UC的潜在药效机制包括了652个潜在的药效靶点，主要涉及NF-κB和mTOR等信号通路。健脾清肠方治疗溃疡性结肠炎的潜在药效机制主要涉及NF-κB和mTOR等信号通路。能够调控NF-κB/HIF-1α信号通路改善TNF-α诱导的炎症模型细胞的炎症反应与通透性改变；能够调控NF-κB/HIF-1α信号通路改善DSS诱导的结肠炎模型小鼠的炎症反应与肠上皮屏障功能缺失；能够调控PERK-eIF2α/NF-κB信号通路和降低细胞因子表达，进而减轻肠上皮细胞炎症因子的级联放大反应。健脾清肠方含药血清及黄芪多糖呈浓度依赖性抑制Tg诱导体外HT29细胞发生ERS，可能与调节PERK-eIF2α/NF-κB信号通路有关系。.本项目探讨了健脾清肠方治疗溃疡性结肠炎的药效机制，丰富中医药在溃疡性结肠炎治疗中的科学内涵，为其临床推广应用提供新的理论依据。