PPAR-γ通路在清肠化湿方治疗溃疡性结肠炎中的作用

Nuclear factor-κB (NF-κB) is a key link to start or inhibit the immune response of patients with IBD, and PPAR-γ is a class of ligand-activated nuclear transcription factor. PPAR-γ can inhibit the transcriptional activity of NF-κB, and regulate the expression of inflammatory cytokines, thus inhibiting the inflammatory response.It plays an important role in the occurrence of ulcerative colitis. Preliminary studies show that: QingChangHuaShi Decoction can significantly improve the clinical symptoms of patients with ulcerative colitis, and it can regulate the expression of NF-κB in intestinal mucosa. but PPAR-γ/NF-κB pathway needs to be further clarified. In this study, SASP, Rosiglitazone and PPAR-γ inhibitor bisphenol A-glycine ether (BADGE) for the control of UC rat model in vivo experiments to observe the bowel dampness whether through upregulation of PPAR-γ inhibition of NF-κB, STAT4 and AP-1 binding activity, reduce inflammation, and play a therapeutic role by improving the barrier function of intestinal mucosa chemical.

核因子-κB的激活或抑制，是启动或抑制IBD患者免疫反应的关键环节，而PPAR-γ是一类由配体激活的核转录因子，可以通过抑制NF-κB的转录活性，调控炎性细胞因子的表达，从而抑制局部的炎症反应，在溃疡性结肠炎的发生、发展过程中起着重要作用。前期研究表明：清肠化湿方能够显著改善溃疡性结肠炎患者的临床症状，抑制炎症反应，促进溃疡愈合，其作用机制与调控肠黏膜组织NF-κB表达有关，但与PPAR-γ/NF-κB通路的关系有待进一步阐明。本研究采用SASP、罗格列酮以及PPAR-γ抑制剂双酚A-二甘氨酸醚（BADGE）为对照的UC大鼠模型的体内实验，观察清肠化湿方是否通过上调PPAR-γ抑制NF-κB、STAT4以及AP-1的结合活性，下调结肠粘膜炎症因子水平，减轻炎症反应，并通过促进肠道黏膜MUC2与TFF3的分泌修复肠粘膜屏障，发挥治疗作用，为阐释中医药的作用机制提供科学依据。

肠黏膜组织NF-қB的激活或抑制，是启动或抑制溃疡性结肠炎（UC）患者肠道免疫/炎症反应的关键环节，而PPAR-γ作为一类由配体激活的核转录因子，可以通过抑制NF-қB的转录活性，在UC发生、发展过程中起着重要作用。前期研究表明中药清肠化湿方对UC的治疗作用与调控肠黏膜NF-қB表达有关，但是否通过PPAR-γ相关通路起作用有待进一步阐明。本课题以PPAR-γ激动剂：柳氮磺胺吡啶（SASP）和抑制剂：双酚A-二甘氨酸醚（BADGE）为对照，采用三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇灌肠法复制大鼠UC模型，设空白组、模型组、清肠化湿方低/中/高剂量组、SASP组、SASP+BADGE组以及清肠化湿方中剂量+BADGE组8个组，通过蛋白质免疫印迹（Western blot）、实时荧光定量PCR（Real-time PCR）酶联免疫吸附测定（ELISA）等方法检测大鼠结肠组织中PPAR-γ、NF-қBp65、p38MAPK 、STAT1、AP-1、β-catenin、NFAT2以及MUC2、TFF3的表达水平。结果显示：空白组大鼠结肠PPAR-γ、NFAT2以及MUC2、TFF3蛋白及mRNA呈高表达，而NF-қBp65、p38MAPK 、STAT1、AP-1、β-catenin蛋白及mRNA呈低表达；TNBS/乙醇法造模后，PPAR-γ、NFAT2蛋白及mRNA表达明显抑制（P<0.01），而NF-қBp65、p38MAPK 、STAT1、AP-1、β-catenin蛋白及mRNA表达显著增高（P<0.01）；清肠化湿方或SASP干预后大鼠结肠PPAR-γ、NFAT2蛋白及mRNA表达均明显回升（P<0.05），而NF-қBp65、p38MAPK 、STAT1、AP-1、β-catenin蛋白及mRNA表达均受到抑制（P<0.01），加用抑制剂BADGE后，PPAR-γ、NFAT2蛋白及mRNA表达又明显回落（P<0.05），而NF-қBp65、p38MAPK 、STAT1、AP-1、β-catenin蛋白及mRNA表达又明显回升（P<0.05）。结果提示PPAR-γ能调控NF-қBp65、p38MAPK 、STAT1、AP-1、β-catenin以及NFAT2的表达，清肠化湿方对UC大鼠的治疗作用主要与促进PPAR-γ的表达有关。