新型植物化合物马齿苋脑苷A调节lin28/miR-let7通路预防慢性肝炎恶性转化的研究

It has been reported that nonresolving inflammation plays a pivotal role in the development and progression of hepatocarcinoma (HCC). In recent years, NF-κB was proved to be a key link between inflammation and cancer. An epigenetic switch involving NF-kappaB, lin28, MicroRNA Let-7, and IL6 links inflammation to cell transformation. Portulacerebroside flavonoids demonstrates a significant liver protection effect by suppressing activation of NF-κB and expression of IL-6. But whether it can inhibit malignant transformation remains unclear. We try to elucidate the molecular mechanisms involved in liver protection effect of PA through analyzing its effect on proliferation and apoptosis of hepatocytes under inflammation stress. Chronic virus vector,realtime PCR,Western blot,flow-cytometry are used to discuss the effect of PA on NF-κB feedback pathway and other important targets on the downstream. New biological imaging technology of 3.0T MRI is arranged to dynamically and quantitatively evaluate the anti-transformation effect of PA on DEN-induced hepatic carcinoma. This study is a positive exploration for a new way of hepatocarcinoma prevention.

肝脏的慢性非可控性炎症是病毒等多种诱因最终致癌的重要环节。在炎癌转化的信号网络中，NF-κB被公认为核心环节，NF-κB、lin28、let-7、IL-6构成的正反馈通路可放大和维持炎症效应，促进细胞的恶性转化。我们首次发现新的植物化合物—马齿苋脑苷A(PA)，并证实其可抑制NF-κB活化和IL-6表达，抑炎护肝效果良好，作用肯定。但PA是否经lin28/let-7正反馈通路抑制肝炎的恶性转化还不清楚。本项目拟1) 通过Realtime PCR、Western blot、慢病毒载体、流式细胞等技术，明确PA是否经lin28/let-7环节调控NF-κB通路；2)明确PA对炎性刺激下肝细胞增殖、凋亡和成瘤性的影响；3）综合运用MRI新型成像技术活体动态追踪PA抑制DEN诱导大鼠炎癌转变进程的作用节点。初步阐明PA预防肝脏慢性炎症恶性转化的作用机制，为其转化医学应用做积极有益的探索。

马齿苋是卫生部明确的药食两用植物，本课题组前期发现其有良好的护肝作用。众所周知，我国是肝癌第一高发大国，每年肝癌发病死亡人数约30万人，占全球肝癌死亡人数的45%，居世界之首。研究证实，肝癌发病前的不可控慢性炎症过程是导致最终炎癌转化的重要环节和关键的干预窗口期。马齿苋能否延缓或阻断慢性肝炎的恶性转化还不清楚。本课题通组，过流式细胞技术（FCM）、qRT-PCR、Western Blot、裸鼠成瘤试验、CCl4急性肝损伤试验、DEN诱导慢性肝炎恶性转化大鼠模型等方法和技术，进一步比较和明确马齿苋预防慢性肝炎恶性转化的最有效组分，并初步探讨其作用机制。研究发现，马齿苋提取物PA可显著降低急、慢性肝炎刺激引起的血清AST、ALT、TNF-α、IL-6水平的升高，显著改善急性和慢性肝炎组织病理学和肝纤维化指标，减少中心叶坏死和脂肪变性程度。MRI结果表明与模型组相比，silymarin组（阳性对照组）和PA组的肿瘤体积直径存在下降趋势。裸鼠成瘤实验结果显示，与TNF-α刺激的HepG2细胞组相比，PA组的肿瘤重量和体积分别减少42.5％和69.2％。PA能显著降低CCl4干预后HL-7702细胞死亡率和细胞凋亡率。CCl4刺激L02细胞实验，PA干预组核内p-RELA的蛋白水平相对实验组显著降低约40%（P<0.05），IKBA、 LIN28B、 IL-6、STAT3 、VEGFA mRNA水平显著降低。我们认为，马齿苋有可能通过抑制慢性炎症刺激下TNF-α诱导的NF-κB的活化，抑制lin28B / miR-let7及自分泌IL-6 / STAT3信号通路的激活，从而延缓肝细胞的慢性炎症恶性转化的进程。本研究为广大肝癌高风险人群的早期营养干预提供了积极的思路，为我国药食同源资源的开发奠定了前期研究基础。