中药马齿苋中新型脑苷脂类成分-马齿苋脑苷A抗肝癌转移机制的实验研究

复发转移是肝癌致死的重要原因，迄今尚无有效的防治方法。目前已知Rac激活的SAPK/JNK通路磷酸化水平升高，可促进肝癌的转移。对该通路进行干预研究，对于抑制肝癌转移药物的发现，具有重要的潜在价值。我们发现首次从中药马齿苋中获得的新型脑苷脂类成分-马齿苋脑苷A具有抑制肝癌细胞转移的作用，但尚不清楚这种作用是否与Rac下游受体SAPK/JNK磷酸化有关。本课题拟采用pull down assay、激光共聚焦、transwell小室和Western blot方法，系统研究马齿苋脑苷A对高转移潜能肝癌细胞（MHCC97H）的Rac-GTP水平、细胞骨架、细胞运动能力和SAPK/JNK级联的影响，分析Rac活性与细胞骨架、细胞运动能力和SAPK/JNK的相关性。进而转染Rac-DA、PI3-K入MHCC97H细胞，观察上述作用能否被逆转，来探讨其抑制肝癌转移的作用机制，为最终临床应用提供理路依据。

马齿苋脑苷A（PCA）为从中药马齿苋中分离到的新型脑苷脂类化合物，在前期的实验研究发现其对人肝癌细胞有一定的抑制作用，为此在本研究中我们选用MTT法、凋亡形态学观察、流式细胞凋亡检测、划痕试验、Transwell小室迁移和粘附试验对马齿苋脑苷A的体外抗人肝癌细胞的作用进行观察，同时还运用FQ-RT-PCR、Western blot等分子生物学方法进行了PCA诱导HCCLM3细胞凋亡的分子机制进行了研究。实验结果显示，PCA能够诱导人肝癌HCCLM3细胞凋亡，其机制是通过激活p38MAPK和JNK信号通路，降低线粒体膜电位，使线粒体膜通透性增加，线粒体中细胞色素c和凋亡诱导因子漏出到细胞质中，进而激活caspase-9和caspase-3，诱导下游的凋亡级联反应，导致细胞死亡。PCA能够抑制人肝癌HCCLM3细胞粘附、侵袭和迁移的能力，其发挥作用的途径与肿瘤细胞转移相关的nm23-H1、TIMP2、MTA1、RhoA、Rac1/Cdc42、MMP-2和MMP-9的基因和蛋白的表达有关。结果提示，PCA具有较好的体外诱导肝癌细胞凋亡和抗肝癌转移的作用。