MicroRNAs在抗结核细胞免疫中调控机制的研究

MicroRNAs是一类能调节编码蛋白基因转录后表达的小分子RNAs，参与调控机体的免疫应答反应，与多种疾病的发生发展密切相关，但在抗结核免疫中的作用国内外尚未见报道。我们前期的研究发现，与健康人相比，活动性结核病人外周血单个核细胞中30个microRNAs表达有显著性差异，其中miR-144*能抑制T细胞增殖及其IFN-γ和TNF-α的分泌，推测microRNAs在抗结核免疫中起了重要的调控作用。本项目计划应用荧光定量RT-PCR技术、流式细胞术、microRNAs过表达及抑制技术、报告基因等技术，研究差异表达microRNAs在活动性结核病人、结核潜伏感染者和健康人的不同细胞亚群中的表达特征，并研究对T细胞、单核/巨噬细胞的激活和效应分子分泌的调控作用，以及调控的信号通路。通过这些研究，了解microRNAs在结核致病及抗结核免疫中的作用，为探索结核病免疫治疗的新途径提供理论依据。

microRNAs是一类能调节编码蛋白基因转录后表达的小分子非编码RNAs，参与调控机体的免疫应答反应，与多种疾病的发生发展密切相关。本课题通过研究活动性结核患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）及其亚群中差异表达microRNAs对免疫细胞的调节作用及其机制，尝试阐明microRNAs在抗结核感染免疫中的作用，为探索结核病免疫治疗新途径提供理论依据。本课题首先采用基因芯片技术筛选出活动性结核患者PBMCs中差异表达microRNAs。采用荧光定量PCR方法对差异表达倍数较高的miR-144*和miR-582-5p进行验证。然后采用荧光定量PCR方法检测miR-144*和miR-582-5p在活动性结核患者和健康人PBMCs中T细胞、单核细胞、B细胞和NK细胞亚群中的表达水平，采用核电转技术在原代细胞或细胞系中过表达miR-144*和miR-582-5p，流式细胞术和酶联免疫吸附实验等方法检测这些microRNAs对免疫细胞的凋亡、增殖和细胞因子的调节作用。通过生物信息学预测miR-144*和miR-582-5p的靶基因和参与的信号通路。采用双荧光报告系统验证microRNAs的靶基因。本研究结果发现，与健康人相比，活动性结核患者PBMCs中有30个microRNAs表达失调，其中miR-144*和miR-582-5p显著高于健康人。miR-144*主要在T细胞亚群中表达，过表达miR-144*能抑制T细胞产生TNF-α和IFN-γ，并且抑制T细胞的增殖。miR-582-5p主要在单核细胞亚群中表达，可以通过靶向FOXO1抑制单核细胞的凋亡。活动性结核患者PBMCs中高表达的miR-144*和miR-582-5分别通过下调T细胞活化和增殖、单核细胞的凋亡参与了抗结核感染免疫的调节，提示microRNAs在抗结核感染免疫中发挥重要的作用。