脂阀蛋白FLOT1通过Akt信号通路调控宫颈癌淋巴结转移的分子机制研究

Retroperitoneal lymph node metastasis is the strongest prognostic factor for early-stage cervical cancer. However, thus far, the molecular mechanism underlying cervical cancer lymph node metastasis remains to be elucidated, and no sufficiently accurate model predicting lymph node metastasis has been established. We revealed that elevated expression of lipid rafts protein FLOT1 is correlated with cervical cancer lymph node metastasis and down-regulation of FLOT1 inhibited cellular motility and invasion; further investigation suggested that down-regulation of FLOT1 may inhibiteAkt/GSK-3b/Snail pathway to reverse epithelial-mesenchymal transition (EMT). The current project is aimed at verifying whether FLOT1 does regulate EMT by Akt/GSK-3β/Snail/E-cadherin pathway, through shRNA down-regulation, over-expression and inhibitor interfere in vitro, and finally warrating the hypothesis in clinical samples. Fulfillment of this project would provide evidence of mechanism of lymph node metastasis inducing by FLOT1 in cervical cancer as well as facilitate the searching of novel diagnostic biomarkers that could sufficiently accurate predict lymph node metastasis of early-stage cervical cancer.

腹膜后淋巴结转移是早期宫颈癌最重要的预后因素，但其转移机制尚未阐明，且缺乏有效预测的分子标记物。我们研究发现，脂阀蛋白FLOT1高表达与宫颈癌淋巴结转移密切相关，沉默FLOT1表达后能抑制细胞的迁移和侵袭，进一步研究提示其机制可能与Akt/GSK-3β/Snail/E-cadherin通路调控的肿瘤转移早期关键事件-上皮细胞间质化(EMT)，有关。本项目拟在细胞模型中通过shRNA沉默、过表达、抑制剂干预等方法明确FLOT1是否通过Akt/GSK-3β/Snail/E-cadherin通路调控EMT过程从而进而促进宫颈癌的淋巴结转移，并在临床标本中加以证实。本项目将阐明FLOT1在宫颈癌中调控淋巴结转移的分子机制，为寻找有效预测早期宫颈癌淋巴结转移的分子标记物提供依据。

在将来很长的一段时间内，宫颈癌仍将是我国女性沉重的疾病和卫生经济负担，而淋巴结转移则严重影响着患者的预后。但因其分子机制不明，目前尚缺乏能有效预测转移风险的分子标记物，也无特异的治疗靶点。我们前期研究发现，脂阀蛋白FLOT1高表达与宫颈癌淋巴结转移密切相关，沉默FLOT1后能抑制细胞的迁移和侵袭，进一步研究提示其机制可能与Akt/GSK-3β/Snail/E-cadherin通路调控的肿瘤转移早期关键事件-上皮细胞间质化(EMT)有关。本项目通过进一步建立稳定表达FLOT1 cDNA的细胞模型，并在细胞模型中通过shRNA沉默、过表达、抑制剂干预等方法进一步明确FLOT1了调控EMT，从而进而促进宫颈癌的淋巴结转移的分子机制。我们发现，过表达FLOT1蛋白能显著提升宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力，而在抑制内源性FLOT1蛋白表达后，宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力则受到明显抑制；同时，宫颈癌细胞侵袭和迁移能力的变化，与其表面表达的EMT分子标志变化息息相关。证实在宫颈癌细胞中，FLOT1蛋白确能通过调控EMT过程，进而促进细胞的侵袭和迁移。进一步研究发现，与原先的科学假说不同，FLOT1蛋白对EMT过程的调控，可能不是通过PI3K/Akt/GSK-3β/Snail通路，而很可能是通过NF-κB通路实现的。这一研究结果，在国内外首次证实了FLOT1蛋白在宫颈癌发生发展过程中的重要作用，并初步揭示了其可能的分子机制。为进一步明确FLOT1蛋白调控EMT过程，从而促进宫颈癌淋巴结转移的确切分子机制，我们在本项目的研究基础上，继续申请并获得了2018年国家自然科学基金地区科学基金项目的资助。本项目和后续研究项目的完成，将有望早日明确宫颈癌淋巴结转移的分子机制，不但能为寻找预测早期宫颈癌患者淋巴结转移风险的分子标记物提供理论依据，更可以为已经存在淋巴结转移的患者提供新的治疗靶点，以期改善其预后并避免手术、放疗、化疗叠加所产生的严重并发症，进一步提高患者的生活质量。