构建拟人化-小鼠分子突变体谱定1型糖尿病自身抗原ZnT8相关B淋巴细胞作用表位的研究

锌转运体SLC30A8（ZnT8）是一种新发现的1型糖尿病（Type 1 diabetes mellitus,T1DM）重要的自身抗原，检测ZnT8抗体可以对T1DM患者进行更早期的预测和临床干预。本项目通过发现不同物种(人，小鼠)之间ZnT8 C 末端（aa268-369）的高度的同源性和极低的交叉反应，获得了本项目的的研究线索，提出了构建"拟人化（humanized）-小鼠分子突变体"的设想，并应用PHYRE软件模拟ZnT8三维空间构象，根据其空间结构特点进行筛选，从而获得重要自身抗原ZnT8的B淋巴细胞表位图谱。并进一步立足于抗原与抗原递呈细胞之间的相互作用，观察ZnT8 B淋巴细胞表位与T淋巴细胞的信息传递作用。本研究将有助于进一步阐明T1DM的免疫学发病机制，并且为发现更好的预测临床前期TIDM患者的方法，开辟新的早期预防和治疗T1DM的途径提供重要的实验依据和理论基础。

1型糖尿病（type 1 diabetes，T1D）是由T细胞介导的针对胰岛组织的一种器官特异性自身免疫性疾病，B细胞和T细胞相互作用（cross talk）在微调抗原特异性免疫反应中起重要作用。锌转运体SLC30A8（ZnT8）是一种重要的T1D自身抗原，其抗体检测可以对T1D患者进行更早期的预测和临床干预。本项目通过构建“拟人化（humanized）-小鼠分子突变体”验证了aa280-353位点为关键的ZnT8表位，并运用PHYRE及Modeller软件模拟ZnT8三维空间构象，根据其空间结构特点进行筛选，从而获得重要自身抗原ZnT8的B淋巴细胞表位图谱。并以此为依据设计合成了包含预测表位的ZnT8多肽，通过原子力显微镜技术（ atomic force microscopy，AFM）及电化学发光法（electrochemical luminescence，ECL）对包含预测B淋巴细胞表位的ZnT8多肽与抗体/ZnT8阳性患者血清的反应性进行验证从而确定ZnT8的B淋巴细胞表位。这将有助于揭示T1D复杂的自身免疫反应过程，并为更好的早期预测和防治自身免疫性糖尿病和其他自身免疫性疾病提供新的策略。