干扰素调节因子（IRF）调控巨噬细胞活化状态对新月体肾炎的影响及干预研究

Cellular immunity play a key role in the progression of crescentic glomerulonephritis (CGN). In the former project, we had revealed that Th17 was one of the most important proinflammatory cell subset in CGN. Batf shRNA inhibited the differentiation of Th17 cells, and reduced the leucocyte infiltration into renal, which attenuated the immunopathology in mouse CGN model. However, lots of research had reported that both of Th1 and Th17 were the essential mechanisms that caused crescentic formation and inflammatory damage. The intervention that could downregulate both Th1/Th17 would be more efficient. In this project, we will apply used ChIPseq analysis, electromobility shift assays (EMSAs), Co-Immunoprecipitation（CO-IP）to identify the interaction pattern for IRFs and molecular mechanism of macrophage activation. Meanwhile, we will establish mouse CGN model to demostrate the role of IRFs in regulating macrophage activation, and the mechanism of macrophage activation in promoting crescentic formation in vivo.Meanwhile, we will overexpress or RNAi the transcription of IRFs, and survey the immunotherapy effect of IRF-4/IRF-5 in regulating macrophage activation and inhibition or reversion of crescentic formation. This research may increase our knowledge of cellular immunology in kidney disease and provide us new approaches to attenuated crescentic glomerulonephritis.

细胞免疫在新月体性肾小球肾炎（CGN）的疾病进程中起着至关重要的作用。我们在前一个项目中证实Th17参与了CGN的发生与发展，通过建立Batf-ShRNA可以有效抑制Th17分化，并且减轻肾脏中炎症细胞的浸润及病理损害。然而，我们及其他学者的研究均证实，在CGN发生过程中，Th1和Th17都起着同等重要的作用。从干预Th1和Th17的共同通路- - 巨噬细胞入手，将更加行之有效。因此，申请者拟拟采用ChIP-Seq技术、凝胶电泳漂移（EMSAs）免疫共沉淀（IP）等技术，在小鼠新月体肾炎模型中，研究巨噬细胞不同活化状态对Th1及Th17浸润的影响，同时观察IRFs对巨噬细胞活化状态的调控，探讨其具体机制，并以IRF-4/IRF-5为靶点，过表达或RNAi抑制IRFs的表达，观察对巨噬细胞活化状态，T细胞活化及新月体形成的影响。丰富目前的肾脏细胞免疫理论，为防治新月体肾炎提供新的策略。

新月体性肾小球肾炎往往起病急，病情发展快，预后差，是肾脏病领域的重点及难点研究方向之一。细胞免疫在新月体性肾小球肾炎（CGN）的疾病进程中起着至关重要的作用。巨噬细胞是天然免疫与获得性免疫的重要桥梁之一，可通过调节T细胞及B细胞的分化，控制细胞免疫的发生与发展。在本项目中，课题组成员通过体内及体外实验，阐明了IRF4/5调控巨噬细胞不同极化，控制后续细胞免疫，参与新月体肾炎发生与发展的分子机制。具体成果包括：（1）IRF4/5在体内及体外均能调节巨噬细胞极化，并调控Th细胞的分化及功能，控制新月体肾炎的发生与发展。（2）在M1/2的诱导体系中，采用Chip-seq发现Stat3及Stat1可分别作用与IRF4/5，干预Stat3及Stat1可通过IRF4/5调控巨噬细胞极化。（3）Microarray检测发现调控细胞线粒体有氧氧化的基因在M1/2分化过程中有显著变化。采用CO-IP证实HKP和PDK-1可与IRF-4作用，干预HKP/PDK-1促进M1分化，PFK-L促进M2的分化，其机制为调节巨噬细胞糖酵解及线粒体有氧氧化代谢途径。（4）在新月体肾炎动物模型中阐明IRF4/5可通过PFK-L及PDK-1，影响巨噬细胞葡萄糖代谢途径，调节了新月体肾炎的发生与发展。（5）在狼疮性肾炎的患者外周血巨噬细胞中可以检测到IRF4/5，Stat1/3及PFK-L及PDK-1等代谢相关基因的变化。本研究进一步丰富了巨噬细胞极化的调节机制，从巨噬细胞代谢的全新视角阐明了巨噬细胞在新月体肾炎发生与发展中的重要作用，为临床防治新月体肾炎提供新的策略，也为后续研究奠定了基础。