mTOR调控滤泡调节性T细胞（Tfr）的分化及其机制研究

Follicular regulatory T cells (Tfr) are characterized by their expression of both Tfh and Treg–like markers. Tfrs develop from natural CD4+ regulatory T cells (nTregs) and suppress germinal center B cell responses. Genetic or other cues that preferentially drive Tfr cell differentiation and it’s suppress role in germinal center B cell responses are yet to be elucidated. Our previously research work showed that Tfr cells have a higher mTOR activity than Treg and Tfh cells after LCMV infection. Also, in CD4 conditional mTOR KO mice, the frequency and function marker of Tfr were significantly decreased, supporting that mTOR may emerge as a critical regulator of the differentiation and function of Tfr cells. To furthrt confirm our hypothesis, we will utilize LCMV virus infection model and several gene KO mice to dissect the molecular mechanism of mTOR in regulating Tfr differentiation. This research will lay solid ground for the development of effective vaccines against viral infections and autoimmunity diseases in human.

Tfr (Follicular regulatory T cells，滤泡调节性T细胞)是新发现的一群表型介于Tfh和Treg的T细胞亚群，由nTreg分化而来，抑制生发中心B细胞反应，但其分化发育调控机制不详。我们发现mTOR在Tfr中的活性远高于Treg和Tfh，mTOR敲除后Tfr频率显著下调，提示Tfr的分化可能受mTOR调控。本研究拟运用LCMV病毒感染模型及系列条件性敲除小鼠，分析mTOR对Tfr细胞亚群分化的调控作用，进一步阐明其分子机制，运用逆转录病毒介导的靶标分子过表达或干扰质粒验证体内调控的分子机制。本研究将明确mTOR调控Tfr分化发育相关靶点，为增强免疫效力及相关自身免疫疾病的治疗提供新思路及新策略。

Tfr (Follicular regulatory T cells，滤泡调节性T细胞)是新发现的一群表型介于Tfh和Treg的T细胞亚群，由nTreg分化而来，抑制生发中心B细胞反应。我们的研究表明，mTOR整合环境因素，在蛋白免疫及病毒感染中调控Tfr的分化发育及功能。我们分选野生型小鼠nTreg细胞（GITR+CD25+CD4+CXCR5-(CD45.2)），使用雷帕霉素（mTORC1上游抑制剂）处理4小时，尾静脉注射，转移至CD45.1 WT小鼠体内，OVA蛋白免疫8天，发现使用雷帕霉素处理及抑制mTORC1信号后，Tfr细胞的频率及数量显著减少。在Treg中系统性剔除mTORC1复合物Rptor蛋白，OVA蛋白免疫8天，Tfr细胞的频率及数量显著减少。Tfr细胞亚群的功能marker，CXCR5、PD1、CTLA4、CD73、ICOS等抑制功能分子MFI也明显降低。Tsc1是mTORC1 通路上游的负调控分子，Tsc1缺失，Tfr细胞的频率及数量明显提高。并且功能分子也显著上调。相应地，在Treg中系统性剔除mTORC2复合物Rictor蛋白，OVA蛋白免疫8天，Tfr细胞的频率及数量没有显著变化，并且Tfr细胞亚群的功能marker也没有明显变化。使用RNA芯片分析进行进一步机制研究，tcf-1及bcl6在Rptor敲除小鼠中Tfr细胞显著下调，进一步研究证实mTORC1通过调控TCF-1介导STAT3磷酸化，TCF-1结合到Bcl6启动子区域，调控Tfr的分化发育。因此，mTORC1在蛋白免疫及LCMV感染中通过活化TCF-1-Bcl-6轴，调控Tfr细胞的分化发育。本研究为增强免疫效力及相关自身免疫疾病的治疗提供新思路及新策略。