超声介导靶向微泡携带Foxp3 siRNA特异性抑制Treg细胞增强抗肿瘤免疫研究

Foxp3+Treg细胞在肿瘤微环境中通过多重机制抑制杀伤性淋巴细胞功能，Foxp3+是Treg细胞发挥免疫负性调节功能的关键活性因子，适宜调变肿瘤微环境中Treg细胞数量及功能，有望恢复机体正常抗肿瘤免疫功能。本项目拟建立小鼠肝细胞癌的动物模型，利用超声微泡携带Foxp3 siRNA转染荷瘤鼠肿瘤微环境中的Treg细胞，明确Foxp3 siRNA干扰后对Treg表型及抑制功能的影响，通过转染后的Treg细胞与CD8+T细胞、NK细胞、NKT细胞共培养，检测杀伤性淋巴细胞的数量，杀伤活性及凋亡水平，并进一步探讨Foxp3+Treg细胞引起肿瘤免疫抑制的作用机制；同时建立一整套肝细胞癌在发生、发展过程中定期随访观察的指标及利用超声造影进行疗效评价的标准，为阻止或延缓肝细胞癌发生、发展，减低术后复发及转移，早期发现新病灶及寻找新型免疫治疗靶点提供理论支持。

背景：免疫治疗具有全身性、无毒性和长效性的特点，现已用于肝细胞癌的早期临床治疗试验。肿瘤微环境中的淋巴细胞通过参与免疫和炎症过程，在肿瘤进展中起到关键的作用。CD4+CD25+ 调节性T细胞（Tregs）可以抑制免疫监视，从而促进恶性肿瘤的生长。因此适宜调变肿瘤微环境中Treg细胞的数量及功能，有望恢复机体正常抗肿瘤免疫功能。.主要研究内容：本项目通过检测Treg细胞、CD8+T淋巴细胞、NK细胞、NKT细胞的相对数量比，研究它们与肝细胞癌的发生、发展的关系。在体内、外利用超声联合微泡转染Foxp3-miRNA抑制Treg细胞的数量和功能，增强了机体的抗肿瘤免疫应答，从而抑制肿瘤生长，并且阐明了Treg细胞对CD8+T淋巴细胞作用的机制。.结果：肿瘤浸润性淋巴细胞中Treg 细胞比例更高，CD8+T淋巴细胞、NK细胞及NKT细胞相对数量比更低，而且Treg 细胞、CD8+T淋巴细胞、NK细胞及NKT细胞与肝细胞癌的分期相关。抑制Treg细胞Foxp3的表达促使Treg细胞凋亡率上升。Treg细胞对CD8+T 细胞有明显的负性调节作用，Treg细胞通过Fas-FasL途径以及颗粒酶/穿孔素途径调节CD8+T淋巴细胞的凋亡过程。.意义：Foxp3敲除可以抑制Treg的数量和功能，使免疫功能得到改善，对阻止或延缓肝细胞癌发生、发展，减低术后复发及转移具有重要意义。