以DNA复制起始蛋白Cdc6为靶点的去甲斑蝥素抗肿瘤机理研究

去甲斑蝥素（NCTD）可通过抑制DNA复制诱导细胞凋亡产生抗肿瘤作用，但其作用机制尚不明确。Cdc6是新近发现的抗肿瘤靶点，其主要功能是起始细胞DNA复制及调控S-G2/M细胞周期进程，研究发现NCTD可诱导肿瘤细胞Cdc6降解。因此，NCTD通过降解Cdc6必将对肿瘤细胞的DNA复制和S-M细胞周期调控产生影响，但迄今为止未见相关研究报道。本项目拟将肿瘤细胞分别同步于G1初期与S初期，观察NCTD对G1初期肿瘤细胞G1-S周期进程、pre-RC组装等的影响，研究NCTD抑制肿瘤细胞DNA复制的机理；观察NCTD对S初期肿瘤细胞S-M周期进程、DNA复制进程及有丝分裂等的影响，研究NCTD诱导肿瘤细胞凋亡的机理；实验同时设立Cdc6过表达组，以明确Cdc6靶点在上述NCTD抗肿瘤机制中的作用。本项目的完成，将深入揭示NCTD的抗肿瘤作用机理，为丰富抗肿瘤靶点、优化抗肿瘤策略提供理论依据。

去甲斑蝥素（NCTD）可通过抑制DNA复制诱导细胞凋亡产生抗肿瘤作用，但其作用机制尚不明确。Cdc6是新近发现的抗肿瘤靶点，其主要功能是起始细胞DNA复制及参与S-M细胞周期监测点调控。本项目旨在研究NCTD通过降解Cdc6对肿瘤细胞的DNA复制和S-M细胞周期调控的影响。【方法】将肿瘤细胞分别同步于G1期，观察NCTD对G1期肿瘤细胞G1-S周期进程、pre-RCs组装的影响，研究NCTD抑制肿瘤细胞DNA复制的机理；将肿瘤细胞分别同步于S期，观察NCTD对S初期肿瘤细胞S-M周期进程、ATR监测点及有丝分裂等的影响，研究NCTD诱导肿瘤细胞凋亡的机理。【结果】首先我们证实NCTD可降解多种肿瘤细胞的Cdc6，提示了靶向Cdc6策略在抗肿瘤治疗中的作用。在G1细胞中，NCTD抑制肿瘤细胞pre-RCs组装，从而抑制DNA复制阻止细胞进入S期。S期细胞中，NCTD可阻碍ATR与染色质的结合，并可促使HU阻滞的细胞进入G2/M期，说明NCTD可抑制ATR的活化，失活S-M监测点。因此NCTD作用后一方面通过抑制DNA复制造成细胞基因组不完整，另一方面同时又会抑制ATR失活S-M监测点，其最终结果将是细胞在基因组不完整的情况下进入有丝分裂，即导致细胞有丝分裂灾变。最后，我们证实NCTD与另外一种靶向有丝分裂药物紫杉醇具有协同杀伤肿瘤细胞的作用。【结论】NCTD通过降解Cdc6蛋白可产生抑制DNA复制和失活S-M周期监测点的双重作用，其最终结果是导致有丝分裂灾变。Cdc6可作为一个有效的抗肿瘤靶点应用到多种肿瘤的治疗/联合治疗策略中。