BLM解旋酶影响前列腺癌增殖的分子机制研究

BLM helicase, an important member of the RecQ helicase family, plays crucial roles in the DNA replication, repair, recombinant and telomere maintenance. It is reported that human bloom’s syndrome (BS) is caused by mutations in BLM gene and BS patients have an enhanced risk of developing a wide variety of cancer types, such as prostatic cancer (PC) and breast cancer and so on. At present, there are seven genes associated with PC, of which BLM gene is the first. The expression level of BLM in PC tissue and PC cells is much higher than that in non-prostatic cancer tissue and benign prostatic hyperplasia cells, and inhibition of BLM expression can inhibit the proliferation of PC cells. However, the regulatory mechanism of the role of BLM helicase in the proliferation of PC cells remains unclear. Therefore, we screened the cellular proteins interacting with BLM helicase, investigated the regulatory effect of N-terminal and core region of BLM posttranscriptional modification in the interacting proteins, studied the effect of nuclear localization of BLM C-terminal on the functions of the interacting proteins, analyzed the key phosphorylation pathways of BLM in the proliferation of PC cells. The molecular mechanism of the effect of BLM helicase on the proliferation of PC cells was clarified from tissue, cell and molecular levels. The research work will provide new insights in diagnosing and treating PC.

BLM解旋酶是人类RecQ解旋酶家族的重要一员，在DNA的复制、修复、重组及端粒的维持等细胞代谢过程中具有重要的作用。BLM基因的缺陷，将直接导致人类Bloom 综合症的发生，患者易患前列腺癌、乳腺癌等癌症。与前列腺癌密切相关的易感基因有7个，BLM则位列之首；与非前列腺癌组织和良性前列腺增生细胞相比，前列腺癌组织和细胞中BLM 的表达明显增加，且BLM低表达也能抑制前列腺癌细胞增殖。但BLM 解旋酶是通过何种调控机制来影响前列腺癌细胞增殖尚不清楚。因此，项目通过筛选鉴定与BLM解旋酶具有相互作用的细胞增殖相关蛋白，研究N端和核心区翻译后修饰对BLM和细胞增殖相关蛋白的调控作用，C端核定位对BLM 和细胞增殖相关蛋白功能的影响，分析与细胞增殖相关的BLM解旋酶关键磷酸化通路，从组织、细胞和分子水平解析BLM 解旋酶影响前列腺癌细胞增殖的分子机制，这将可能为前列腺癌症的诊断和治疗提供新思路。

研究表明，BLM解旋酶与前列腺癌（PCa）发生具有相关性，但是BLM如何调控PCa细胞增殖尚不清楚。本项目首先利用免疫共沉淀（Co-IP）联合质谱分析的方法，从前列腺癌PC3细胞中筛选得到537个与BLM互作的细胞蛋白，它们主要参与解旋酶活性的正向调节、DNA错配修复、组蛋白甲基化等生物学进程，双链DNA连接、DNA解旋酶活性、DNA依赖的ATPase活性等分子功能，以及DNA错配修复、细胞周期、癌症调控等信号通路。通过RNA Pull-down和Co-IP试验，发现PVT1在PCa细胞内靶向结合BLM，并且降低BLM泛素化水平；同时，PVT1通过吸附miR-27b-3p影响BLM基因的表达，并通过PVT1/miR-27b-3p/BLM/MIB1信号通路影响PCa细胞的增殖和迁移。另外，研究发现BLM和EZH2在细胞核中存在相互作用，两者在PCa组织样本中相比于正常前列腺组织高表达；联合干扰BLM和EZH2的表达能显著降抑制PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并且BLM/EZH2/MDM2/P53信号通路调控了PC3细胞的增殖和迁移。此外，对前列腺癌、正常前列腺、前列腺增生组织样本进行iTRAQ分析，获得了对细胞增殖有显著影响并与BLM相关的磷酸化位点AKT (Ser473)和PRAS40 (Thr246)，并且BLM表达量与AKT (Ser473)和PRAS40 (Thr246)磷酸化程度相关。同时，BLM、pAKT (Ser473)和pPRAS40 (Thr246)表达量下调对PCa细胞增殖有明显抑制作用，并且BLM表达量下调可明显增加PCa细胞中ROS的产生，因而确定了BLM参与ROS介导的DNA损伤修复。本项目从组织、细胞和分子水平解析了BLM解旋酶影响PCa细胞增殖的分子机制，这为PCa的诊断和治疗提供新思路，也为靶向治疗PCa提供了新的研究方向。