TBX21基因启动子rSNP对慢性HBV感染者Th1/Foxp3+Treg分化失衡调节的机制研究

T-bet调控的Th1和Foxp3+调节性T细胞(Treg)分化在慢性HBV感染的免疫耐受状态中起关键作用。T-bet基因(TBX21)表达及其在诱导Th1分化、抑制Treg功能方面存在显著的个体差异。我们的前期研究从群体水平和流行病学角度首次证实了TBX21启动子区T-1993C多态性与慢性HBV感染的遗传关联。初步分析和前期实验提示，与疾病关联的T-1993C位点是最可能影响TBX21等位特异性表达的调控性单核苷酸多态性(rSNP)功能位点。本研究拟采用EMSA、荧光素酶报告基因试验、序列删减分析、等位特异性染色质免疫沉淀、甲基化特异性PCR及三色流式细胞技术等手段，证实T-1993C位点的等位特异性顺式调控作用，并观察T-1993C位点T/C等位变异对T淋巴细胞的TBX21表达量、Foxp3去甲基化水平及Th1分化的影响，以期深入认识TBX21基因rSNP在慢性HBV感染中的作用。

T-bet通过调节IFN-γ生成而极化CD4+ I类协助性T淋巴细胞（T helper I, Th1）, 其表达水平与自身免疫性、感染性及变应性疾病密切相关。我们先前的病例对照研究表明TBX21启动子区T-1993C与HBV感染自限性有关。本项目研究发现TBX21 启动子区T-1993C单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphism，SNP) 影响中国人I型自身免疫性肝炎易感性。应用EMSA、ChIP分析、荧光素酶报告基因试验在体外及活体细胞内证实, 反式转录因子YY1和USF-1分别与TBX21启动子区T-1993C及其连锁不平衡T-1514C位点区域结合，YY1与-1993C等位结合量明显高于-1993T等位，而USF-1与-1514C等位结合量明显高于-1514T等位，并对TBX21基因启动子转录活性起负性调控作用。通过流式细胞方法检测外周CD4+淋巴细胞内T-bet及Th1/ Th2极化相关细胞因子IFN-γ、IL-4水平；结果显示，T-bet和IFN-γ的表达从-1993TT/-1514TT→-1993TC/-1514TT→-1993TC/-1514TC→-1993CC/-1514TC基因型呈显著递减模式，而IL-4则呈现递增趋势，提示T-bet等位表达差异将影响Th1/Th2极化平衡。本项目研究结果为阐明HBV感染自限性和免疫反应介导肝损害的宿主遗传学提供实验依据。