基于NF-κB对溃疡性结肠炎树突状细胞、紧密连接蛋白影响的清肠化湿方作用机制研究

近来，随着对溃疡性结肠炎免疫机制研究的深入，发现NF-κB过度表达能诱导树突状细胞成熟，导致抗原提呈功能亢进，引起炎症反应及肠黏膜紧密连接的改变，形成溃疡。因此，抑制NF-κB的表达，调控树突状细胞抗原提呈功能、修复紧密连接已成为治疗的新途径。前期研究表明：清肠化湿方（黄连、黄芩、木香、炒白芍、地榆、白芷、生甘草）能够显著改善溃疡性结肠炎患者的临床症状，抑制炎症反应，促进溃疡愈合，其作用机制与调控肠黏膜组织NF-κB表达有关，但与影响DC抗原提呈和修复紧密连接的关系有待进一步阐明。本研究利用具有NF-κB及DC抗原提呈功能、紧密连接改变的溃结动物模型，研究清肠化湿方通过抑制NF-κB的表达，是否影响树突状细胞成熟与分化，下调抗原提呈功能，减轻炎症反应，从而保护肠黏膜紧密连接结构，促进溃疡修复，为临床用药提供科学依据。

近年来，随着对溃疡性结肠炎免疫机制研究的深入，发现NF-κB过度表达能诱导树突状细胞成熟，导致抗原提呈功能亢进，引起炎症反应及肠黏膜紧密连接的改变，形成溃疡。本研究利用NF-κB基因圈套寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)转染后的DC共刺激信号分子表达改变的体外实验和具有NF-κB、DC抗原提呈功能及黏膜屏障改变的溃结动物模型的体内实验，阐明清肠化湿方通过抑制NF-κB的表达，影响树突状细胞成熟与分化，下调抗原提呈功能，减轻炎症反应，从而保护肠黏膜紧密连接结构，促进溃疡修复的作用机制。研究内容包括通过体外实验观察清肠化湿方对NF-κB与DC抗原提呈功能的影响；通过体内实验观察清肠化湿方调控UC模型大鼠结肠组织NF-κB表达及对下游炎性因子的影响；清肠化湿方对UC模型DC数目、表型及功能的影响；清肠化湿方对UC大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白的影响；清肠化湿方对UC模型大鼠结肠组织病理形态学的影响。研究结果表明：（1）以NF-κB基因圈套寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)转染后的小鼠骨髓来源树突状细胞生物学特性为对照，通过rmGM-CSF诱导后5天后，清肠化湿方有效降低了DC表面抗原CD40、MHCⅡ共刺激分子的表达,抑制了NF—κB的活化入核，并且清肠化湿方可明显减轻HT-29细胞炎症反应，抑制巨噬细胞趋化，减少NF-κB活化入核、降低TLR4的表达、减轻IL-8分泌；（2）清肠化湿方可以减少UC模型结肠黏膜NF-қB的表达，降低促炎细胞因子IL-6、IL-1-β、TNF-α的分泌水平，减少结肠黏膜及MLN DCs的数目，抑制DC的活化，降低UC结肠黏膜黏附分子ICAM-1的表达水平，（3）清肠化湿方增强了大鼠结肠组织中occludin、claudin-1蛋白的表达，修复肠黏膜紧密连接，修复结肠组织黏膜。本研究以特异性NF-κB 抑制剂和阳性药物为对照，从抗原提呈途径和肠道屏障途径观察以NF-κB为枢纽，影响DC抗原提呈及黏膜紧密连接的作用机制，确立NF-κB为清肠化湿方作用的关键靶点，为临床用药提供客观依据，为开发治疗UC的中药新药打下了科学基础。