清肠化湿方诱导Tol-DC调控T细胞治疗溃疡性结肠炎作用机制的研究

Enhancements on the Mature dendritic cells of antigen presenting cause T cell differentiation and imbalance, which destroy the immunological tolerance, and result in intestinal mucosal inflammation, that is the important pathogenesis of ulcerative colitis. Preliminary studies showed that QingChangHuaShi decoction significantly improved the clinical symptoms in patients with UC, and promoted the healing of mucous membrane, which is related to inhibiting of dendritic cells mature, reducing antigen presentation function, and increasing inflammation suppression factor expression of IL-10. However, the relationship among QingChangHuaShi decoction, tolerogenic dendritic cells and regulatory T cells remains to be further clarified. The research adopts UC rat of TNBS model intervened by QingChangHuaShi decoction，initial T cells in vitro intervened by tolerogenic dendritic cells which also induced by QingChangHuaShi decoction, and UC rat in vivo, to observe the effects of QingChangHuaShi decoction on T cells and related cytokines. This research clarifies that the treatment mechanism of QingChangHuaShi decoction inducing tolerogenic dendritic cells to promote the balance of Treg/Th17，causing T cell clonal anergy, and establishing immune tolerance. It has great significance to Chinese medicine.

树突状细胞成熟后抗原提呈功能增强，致使T细胞分化失衡，破坏了免疫耐受，引起肠道黏膜的免疫-炎症反应，是导致溃疡性结肠炎发病的重要机制。前期研究表明：清肠化湿方能够显著改善溃疡性结肠炎患者的临床症状，促进黏膜愈合，其作用机制与抑制树突状细胞成熟，下调抗原提呈功能，增加抑炎因子IL-10表达有关，但清肠化湿方与耐受性树突状细胞、分泌IL-10的调节性T细胞之间的关系有待进一步阐明。本研究采用清肠化湿方干预TNBS造模的溃疡性结肠炎大鼠模型；同时使用清肠化湿方诱导的耐受性树突状细胞体外干预初始T细胞、体内干预溃疡性结肠炎大鼠模型，观察清肠化湿方对T细胞及相关细胞因子的影响。阐明清肠化湿方通过诱导生成耐受性树突状细胞，促进Treg/Th17恢复平衡及导致T细胞克隆无能，建立免疫耐受，从而发挥治疗作用的途径和有效机制，为溃疡性结肠炎中医调气治法提供科学支持，为清肠化湿方的临床应用提供客观依据。

大量研究表明在溃疡性结肠炎（UC）诸多发病因素中免疫异常起了重要作用。树突状细胞（DC）破坏免疫耐受可导致UC。免疫反应的类型取决于DC的成熟度。未成熟的DC具有通过促进Treg/Th17的平衡诱导免疫耐受的功能。初始T细胞增殖后分化成为Th细胞和Treg，两种分化间的平衡对于维持肠道的免疫功能稳定至关重要。Th17分泌促炎细胞因子IL-17。IL-10是由Treg产生的抗炎细胞因子。课题组既往研发的具有清肠化湿、调气行血功效的清肠化湿方在临床上显示了较好的疗效，本项目中课题组开展了清肠化湿方诱导Tol-DC干预初始T细胞的体外实验及作用于UC动物模型的体内实验。研究检测清肠化湿方干预LPS刺激后成熟DC的表面协同刺激分子指标（MHC II、CD80、CD86）和细胞因子（IL-12等）的表达量。然后观察清肠化湿方处理的DC对小鼠初始T细胞和TNBS诱导的结肠炎的作用。研究结果显示清肠化湿方在体外和体内均能抑制MHC II、CD80和CD86的上调，降低IL-12的分泌，其所诱导的Tol-DC具有未成熟DC的形态与功能。直接暴露于清肠化湿方的DC刺激Th17增殖的能力下降，IL-17mRNA的表达量减少，同时能够诱导初始CD4+T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg分化并增加IL-10mRNA的产生。清肠化湿方和清肠化湿方处理的DC能够减少TNBS造模小鼠IL-17、IL-2的基因和蛋白表达水平，升高IL-10、Foxp3水平和降低的Th17比例。研究结果证实了清肠化湿方能够通过诱导生成Tol-DC（1）促使初始T细胞向Treg分化，上调抑炎因子IL-10分泌，下调致炎因子IL-17分泌，减轻肠道炎症反应，恢复Treg/Th17平衡；（2）导致T细胞克隆无能。从而建立免疫耐受，是其发挥UC治疗作用的途径和有效机制之一。研究为清肠化湿方的临床应用提供了客观依据，为UC中医调气治法提供了科学支持，具有重大科学意义。