三维嗅鞘细胞桥联合GDNF对海绵体神经缺损导致勃起功能障碍的治疗作用及机制研究

The high incidence of erectile dysfunction caused by radical prostatectomy related transection of the cavernous nerve, can seriously affect the patients' quality of life. Olfactory ensheathing cells combined glial cell line-derived neurotropic factor (GDNF) will be used in the treatment of rat erectile dysfunction caused by cavernous nerve transaction in our present research. And this research will provide some evidences on preventive treatment of this kind of erectile dysfunction. After the animal model used rat is successfully built, a series of experiments will be done. Such as survival of neurons after injury by Nissl staining; the apoptosis of neurons with caspase immunofluorescence staining, end labeling staining and Hoechst nuclear tag; evaluating the axonal degeneration and regeneration of the injured nerve with Nerve fibers (NF) immunofluorescence staining, horseradish peroxidase (HRP) retrograde labeling and marking nitric oxide synthase (NOS) positive nerve fibers with NADPH; observing the axon regeneration of injured segment with electron microscopy; evaluating the recovery of the erectile dysfunction after the cavernous nerve's transaction with nerve electrophysiology and penis manometry.

前列腺癌根治术中损伤、离断海绵体神经导致的术后勃起功能障碍（ED）发生率高，严重影响患者生活质量。本课题拟采用嗅鞘细胞神经支架联合胶质细胞源性神经生长因子（GDNF）治疗成年大鼠海绵体神经离断导致的ED，为临床预防性治疗前列腺癌根治术后勃起功能障碍提供实验依据。研究采用大鼠构建动物模型，通过尼氏染色观察损伤后神经元的存活；采用caspase免疫荧光染色、末端标记染色和Hoechst核标记观察神经元的凋亡情况；采用神经纤维（NF）免疫荧光染色、辣根过氧化物酶（HRP）逆行标记以及NADPH标记一氧化氮合酶（NOS）阳性神经纤维等方法评估损伤神经的轴突溃变和再生，采用电镜观察损伤后过损伤段的轴突再生情况；采用神经电生理、阴茎海绵体测压等方法评估海绵体神经损伤后勃起功能的恢复情况。

前列腺癌根治术中损伤、离断海绵体神经（CN）导致的术后勃起功能障碍（ED）发生率高，严重影响患者生活质量。嗅鞘细胞（OECs）是最具有前景的神经修复细胞之一，用于中枢神经系统修复已取得较好效果。胶质细胞源性神经生长因子（GDNF）是目前发现的在体外支持运动神经元生长最有效的神经营养因子。. 本课题拟采用携带有OECs的神经支架联合GDNF治疗成年大鼠海绵体神经（CN）离断导致的ED，为临床预防性治疗前列腺癌根治术后勃起功能障碍提供实验依据。. 研究采用大鼠构建动物模型，取大鼠嗅球表层进行OECs的原代培养，采用改进的Nash差速贴壁法进行纯化。用电刺激海绵体神经（CN）评估勃起功能恢复；采用masson染色及免疫荧光测定海绵体内平滑肌含量，nNOS免疫荧光染色测定海绵体组织及阴茎背神经中nNOS阳性纤维含量，Caspase-3/PECAM-1双染评估内皮细胞凋亡。. 结果显示，OECs具有较强的外周神经修复作用，联合应用OECs及硅胶管神经支架已具有较强的修复作用。能够通过保存海绵体内平滑肌和海绵体组织及阴茎背神经中的nNOS阳性纤维及减少内皮细胞的凋亡来恢复勃起功能。.结果为前列腺癌根治术（RP）后CN损伤所致ED的治疗提供了一种新的途径，证实了OECs在对外周神经的修复同样有效，为进一步OECs联合GDNF进行修复打下了基础。