针刺增强丹参酮ⅡA促缺血心肌血管新生效应及其H3K9ac调控机制研究

Acupuncture therapy combined with medication has been widely used in clinic practice in China and proved to be effective in the treatment of many disorders.The current studies have shown that acupuncture can enhance medicines’effects in coronary heart disease.But the mechanism and regular pattern are still unclear.Our latest study has shown that acupuncture could upregulate the factors related with angiogenesis in ischemia myocardial tissues.In this study,we will observe the effects of the combination of acupuncture and medication after myocardial ischemia in rats.We will use interdisciplinary knowledges,such as Electrophysiology，Biochemistry ，Morphology ，Molecular Biology, Epigenetic,to study this project.Simultaneously,we will employ multiple technologies,such as RNA-sequencing and Chromation Immunoprecipitation Assay(ChIP-Assay) to determine that acupuncture combined with Tanshinine ⅡA can protect the heart and promote angiogenesis after myocardial ischemia through H3K9 acetylation regulation.This study may provide reliable experimental basis for the theory “acupuncture combination of medication may be more effective than single therapy”and clinic practice.

探寻安全、有效治疗心肌缺血的方法一直是医学界研究的热点和难点，有效促心肌缺血区域侧支循环形成和血管新生是近年来心肌保护研究的重点。基于“针药结合协同增效”的理论，我们进行针刺联合丹参酮ⅡA治疗心肌缺血研究，结果初步显示出良好的加强心肌保护效应，但其增效机制尚未阐明。前期研究中，我们已证实针刺促缺血心肌血管新生实现心肌保护，且该效应受组蛋白乙酰化表观遗传修饰调控。因此，本课题拟采用心肌缺血模型大鼠为载体，以促血管新生实现缺血心肌保护为突破口，采用电生理、生物化学、形态学、分子生物学、表观遗传学（RNA-seq、ChIP-Assay）技术，从组蛋白表观遗传调控基因表达、转录入手，围绕“H3K9乙酰化—目标基因表达、转录—血管新生—心肌保护”链条效应进行系统研究，为深入揭示针刺联合丹参酮ⅡA协同促心肌保护提供实验依据，丰富针药结合协同增效理论科学内涵，为其临床应用推广提供数据支持。

冠心病心肌缺血是临床常见病、多发病，大量临床研究证实，针灸和中药丹参酮可有效改善冠心病患者的临床症状。研究表明，针药结合对心肌缺血治疗效应优于单独针灸或药物，显示出良好的协同增效作用，但其增效机制尚未得到系统研究和全面阐释，一定程度上限制了其在临床的推广。因此，对其增效机制的研究是推广“针药结合”治疗模式急需解决的瓶颈问题。.我们的前期研究表明，针灸改善缺血心肌功能与其促血管新生密切相关。故本研究采用公认的结扎左冠状动脉前降支的方法建立大鼠心肌缺血模型，以电针“内关”（PC6）和腹腔注射丹参酮ⅡA为干预手段，将实验动物分为5组：假手术组、模型组、电针组、丹参酮ⅡA组、电针联合丹参酮ⅡA组，通过评价各组大鼠的心电图、血清心肌酶、心肌细胞组织结构和心肌组织纤维化程度，从心脏的功能、生化指标、心脏形态结构角度全面客观地评价电针联合丹参酮ⅡA对心肌缺血模型大鼠的心肌保护效应，初步证实了电针联合丹参酮ⅡA可增强对缺血心肌的保护，具有协同增效的效应。在客观评价明确效应的基础上，通过评价心肌缺血模型大鼠心肌组织的微血管数量和密度、血管新生相关因子VEGF及CD151的mRNA和蛋白表达水平，从微观层面客观地证实了电针联合丹参酮ⅡA可增强大鼠缺血心肌的血管新生。再进一步引入生命科学前沿技术RNA-seq、ChIP-seq，通过全基因组测序，明确了H3K9乙酰化对血管新生相关因子的调控作用，初步验证了“电针联合丹参酮可通过H3K9乙酰化促进缺血心肌血管新生，从而实现心肌保护”的假说。.通过本研究初步形成了“电针联合丹参酮ⅡA干预—增强H3K9乙酰化—促进目标基因表达、转录—血管新生—心肌保护”链条效应机制，为针药结合协同增效理论提供可靠的数据支持，同时，也为其临床应用推广提供科学的实验依据。