酪氨酸激酶受体EphA3在肝癌转移中的作用及其分子机制的研究

肿瘤复发和转移是影响肝癌预后的主要原因，对肝癌转移分子机制的深入研究将有助于肝癌的治疗。酪氨酸激酶受体EphA3在多种恶性肿瘤中的异常表达常与肿瘤转移、侵袭及心脏发育上皮间质转分化(EMT)进程密切相关。我们的研究发现，在肝癌细胞中EphA3基因表达异常下调，启动子甲基化状态升高。在克隆该基因的过程中，我们首次发现人肝癌组织中普遍存在SAM基序缺失的EphA3。SAM基序是使分子聚集的一个高度保守的结构域，而Eph受体的激活依赖于高程度的聚集状态，提示SAM基序的缺失可能对EphA3的结构和活性产生影响，从而影响其在肝癌中的调控作用。本项目将通过对临床组织标本中野生型和缺失突变型EphA3的表达和甲基化水平的检测、细胞生物学实验和活体荧光动物模型来探讨EphA3在肝癌转移过程中的作用，并用晶体结构分析和基因芯片技术分析其作用机制，为今后肝癌的治疗和预后判断提供新的靶点和策略。

肿瘤转移是肿瘤恶性转化最重要的生物学特征之一，是晚期癌症患者不能手术根治的主要原因，是引起癌症患者死亡的首要因素。它是一个复杂的、多因素调控的病理生理过程，阐明肿瘤转移的分子和细胞学机制将为恶性肿瘤的根治提供线索。大量研究资料表明，Eph酪氨酸受体家族在多种恶性肿瘤中表达异常，它们在肿瘤发生发展中的重要作用得到了越来越多的重视和研究。.本项研究通过对临床组织标本中EphA3表达水平的检测，发现EphA3在多种肿瘤组织上表达明显下调，推测其在肿瘤发生发展过程中具有抑瘤作用。利用分子生物学方法构建EphA3过表达/低表达肿瘤细胞系进行细胞迁移和侵袭实验，结果表明EphA3具有抑制肝癌、食管癌细胞迁移和侵袭的能力，且此抑制能力与其胞内磷酸化水平和激酶活性状态有关。细胞形态观察及胞内微丝骨架显色以及EMT标志物表达水平检测表明EphA3具有抑制食管癌发生EMT转移的功能。功能机制研究表明EphA3可能通过促进小GTP酶RhoA的活化引起细胞骨架的改变而抑制细胞运动能力，从而抑制肿瘤转移。肿瘤转移相关的生物芯片检测发现EphA3过表达引起了与肿瘤发生发展相关的多条信号通路如mToR, MAPK通路、微丝骨架调控、粘着斑调控等通路的改变，为阐明肿瘤转移的分子和细胞学机制提供了重要的线索。