木豆叶促大鼠缺血心肌血管新生作用机制的研究

Angiogenesis plays a key role in revascularization and long-term prognosis in patients with ischemic heart diseases.This research intends to explore the mechanisms of pigeonpea leaves based on the effects of promoting ischemic myocardial angiogenesis.According to the preliminary study,we found that pigeonpea leaves have the estrogen-like effect.So we propose a hypothesis that "pigeonpea leaves could activate several signaling pathways and produce a series of physiological effects through combination of the estrogen receptor(ER),and ultimately promote ischemic myocardial angiogenesis", and intends to demonstrate it at various levels. Using the ER blockers and PI3K, P38K and MAPK signaling pathway blockers,which are closely related to angiogenesis,to prove the effect targets and signal pathways of angiogenesis in human umbilical vein endothelial cell model;using 2D-Gel and MALDI-TOF/TOF MS to study the changes of myocardial protein spectral systematiclly and integratedly after the pigeonpea leaves intervention in rat model of myocardial ischemia;inquiring biological information database to analyze the functions of expressed differently proteins.This research will comprehensively explore the mechanisms of pigeonpea leaves in promoting ischemic myocardial angiogenesis by following the idea of "target-way-level" and combining with the results of vitro and vivo tests,and provides experimental basis for reasonable application in treatment of ischemic heart diseases.

促血管新生对缺血性心脏病患者缺血后的血运重建及远期预后起关键作用。本课题基于木豆叶具有促大鼠缺血心肌血管新生的作用，拟进一步研究该作用的发生机制。根据前期研究发现木豆叶具有植物雌激素样作用，我们提出了"木豆叶通过结合雌激素受体（ER），激活多条信号通路产生一系列生理效应，最终促进缺血组织血管新生"的假说，并拟在多个层面论证该设想。利用ER阻断剂及与血管新生密切相关信号通路PI3K、P38K、MAPK阻断剂，探明木豆叶在脐静脉内皮细胞模型上促血管新生的作用靶点、信号通路；采用2D-Gel、MALDI-TOF/TOF MS系统性、整合性研究木豆叶干预后心肌缺血大鼠模型心肌蛋白谱的改变情况；查询生物学信息库分析表达差异蛋白的功能。本课题将沿循"靶点-途径-层次"的思路，结合体内外试验结果，全面探讨木豆叶促缺血心肌血管新生的作用机制，为其合理应用于缺血性心脏病的治疗提供实验依据。

促血管新生对缺血性心脏病患者缺血后的血运重建及远期预后起关键作用。本课题基于木豆叶具有促大鼠缺血心肌血管新生的作用，拟进一步研究该作用的发生机制。根据前期研究发现木豆叶具有植物雌激素样作用，我们提出了"木豆叶通过结合雌激素受体（ER），激活多条信号通路产生一系列生理效应，最终促进缺血组织血管新生"的假说，并拟在多个层面论证该设想。利用大鼠心肌缺血模型，考察木豆叶对心肌缺血损伤的保护作用；利用免疫组化法研究木豆叶促大鼠缺血心肌血管新生的作用；利用ER阻断剂及与血管新生密切相关的信号通路PI3K阻断剂，探明木豆叶在脐静脉内皮细胞模型上促血管新生的作用靶点、信号通路。本课题沿循“靶点-途径-层次”的思路，结合体内外试验结果，全面探讨木豆叶促缺血心肌血管新生的作用机制，为其合理应用于缺血性心脏病的治疗提供实验依据。研究结果显示，木豆叶能够明显缩小心肌梗死面积，提高缺血区心肌微血管密度，促进缺血后大鼠心肌组织ER-α的表达，且缺血区ER-α阳性细胞数与心肌微血管密度表现为同样的变化趋势，说明木豆叶对缺血造成的大鼠心肌损伤具有一定的保护作用，能够促进心肌梗死后血管新生，而这种效应可能是通过结合雌激素受体ER-α来调节的。同时，细胞实验结果显示，木豆叶可提高缺氧脐静脉内皮细胞的活性、迁移能力和成管能力，促进细胞PI3K、p-Akt和VEGF蛋白表达，应用雌激素受体抑制剂ICI 182780和PI3K信号通路抑制剂LY294002处理后，VEGF蛋白表达水平明显降低。结合体内外实验结果，我们发现木豆叶可能通过作用于雌激素受体，激活PI3K/Akt信号通路，上调VEGF蛋白表达水平，从而促进大鼠缺血心肌血管新生。