重组腺相关病毒介导siRNA抑制Notch信号抗肝纤维化的实验研究

肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段。肝星状细胞（HSC）的活化是肝纤维化形成和发展的中心环节，抑制HSC的活化和增殖可阻断甚至逆转肝纤维化。Notch信号是调控多种细胞增殖、分化和凋亡的关键信号通路，申请者初步研究发现Notch3蛋白的表达与肝纤维化病变相关，在此基础上，本课题拟进一步深入研究分离培养的大鼠HSC和表型活化的HSC细胞系中Notch3信号通路的活性及其与HSC表型转化的关系；构建靶向干扰Notch3的siRNA重组腺相关病毒载体，分别转染HSC和导入肝纤维化模型大鼠体内，拟采用分子生物学，细胞生物学和病理形态学等方法，从体外和体内实验两个层面来研究抑制Notch3信号对HSC表型转化的调控和生物学特性的影响，阐明其在肝纤维化发生发展中的作用机理，并探索以此为靶点治疗肝纤维化的可行性，为临床肝纤维化的防治提供新的理论和方法。

肝星状细胞（HSC）的活化是肝纤维化形成和发展的中心环节，抑制HSC的活化和增殖可阻断甚至逆转肝纤维化。Notch信号是调控多种细胞增殖、分化和凋亡的关键信号通路。本研究证实活化的HSC高表达Notch3、Jagged1和Hes1蛋白，且Notch3/Jagged1信号通路的激活与HSC的活化密切相关。体外试验发现用γ-分泌酶抑制剂（DAPT）或特异性RNAi靶向抑制Notch3/Jagged1信号的转导，HSC表达α-SMA和collagen I蛋白明显下降。大鼠肝纤维化模型体内试验结果显示DAPT和rAAV-Notch3-shRNA 都可不同程度的改善肝纤维化病变。我们进一步研究发现抑制Notch3/Jagged1信号后，肝细胞上皮-间质转分化过程（EMT）被抑制，肝细胞凋亡减少。本项目探索了以重组腺相关病毒载体rAAV介导shRNA靶向干扰Notch3/Jagged1信号的新基因疗法治疗大鼠肝纤维化，为将来可能的临床应用提供了实验依据。