Anginex重组腺相关病毒抗血管生成信号转导通路的研究

Anginex是一种人工设计合成的βpep肽，通过抑制新生血管生成发挥抗肿瘤作用，而抑制血管生成的具体机制尚不明确。细胞内存在多条影响血管生成的信号转导通路，如PI3K/Akt、Ras/Raf/MEK/ERK、NF-kappaB等。研究表明，这些信号转导通路参与肿瘤周围新生血管内皮细胞的迁移、增殖、生存，在肿瘤周围血管新生过程中具有重要的作用。本项目利用分子生物学技术和病毒重组技术，构建可分泌表达Anginex的重组腺相关病毒，并鉴定其病毒活性及生物活性，以期获得Anginex的稳定表达。通过基因芯片技术筛选出相关的信号转导通路，并应用RT-PCR及Western-Blot进行基因和蛋白表达水平的检测以确定Anginex的作用靶点，进一步探讨其抗肿瘤血管生成的机制。因此本项目不仅为肿瘤病人提供一种新的生物治疗方法，更对探寻抗血管生成治疗的新策略具有一定的意义。

Anginex是一种人工设计合成的βpep肽，通过抑制新生血管生成发挥抗肿瘤作用，而抑制血管生成的具体机制尚不明确。细胞内存在多条影响血管生成的信号转导通路，如PI3K/Akt、Ras/Raf/MEK/ERK、NF-kappaB等。研究表明，这些信号转导通路参与肿瘤周围新生血管内皮细胞的迁移、增殖、生存，在肿瘤周围血管新生过程中具有重要的作用。本课题采用三质粒共转染方法成功构建了可分泌表达Anginex的重组腺相关病毒（rAAV2-anginex），分别从体内外验证了其抗肿瘤和抗血管生成功能。体外MTT细胞活力检测、EDU增殖实验、流式细胞术检测细胞周期和凋亡、Transwell细胞迁移和侵袭实验以及小管形成实验表明Anginex重组腺相关病毒具有抑制内皮细胞增殖、迁移和侵袭，诱导内皮细胞凋亡，从而发挥抗血管生成作用。体内鸡胚绒毛膜尿囊实验和裸鼠移植瘤模型实验证实Anginex重组腺相关病毒具有抗血管生成和抗肿瘤生长作用。另外，Western blot 实验结果显示，Anginex重组腺相关病毒可以通过降低cyclin D1蛋白 的表达抑制HUVEC细胞从G1期向S期过渡；通过增加促凋亡蛋白Bax, Fas 和cleaved-caspase-3表达水平，减少凋亡抑制蛋白Bcl-2表达水平而发挥促凋亡作用。进一步机制探索发现，Anginex重组腺相关病毒处理组Akt磷酸化水平降低，JNK磷酸化水平升高，同时激活NF-κB信号通路。人卵巢癌移植瘤裸鼠标本免疫组织化学结果显示Anginex重组腺相关病毒处理组VEGF165表达水平降低。上述实验结果表明Anginex重组腺相关病毒可能通过调节Akt、JNK和NF-κB信号通路发挥抗血管生成和抗肿瘤生长作用。因此本项目不仅为肿瘤病人提供一种新的生物治疗方法，更对探寻抗血管生成治疗的新策略具有一定的意义。