EV71病毒非结构蛋白2A的功能及作用机制研究

EV71(Enterovirus 71)急性感染可引起手足口病及中枢神经系统损害，严重可导致死亡，其感染和流行已成为危害人类健康的重大社会问题。EV71病毒非结构蛋白2A具有蛋白酶活性，是转录激活因子，在病毒感染和复制中具有重要功能，但其调控方式及作用机制目前尚不十分清楚。我们前期工作通过酵母双杂交筛选出EV71-2A的互作蛋白- - RASSF4蛋白，且GST-Pull down实验初步证实了它们的相互作用。本项目将利用荧光共定位、序列突变分析等多种方法进一步确证它们的相互作用及结合位点，利用蛋白酶活性分析、转录活性分析、RNA分析、Western blotting和RT-PCR等探索EV71-2A与RASSF4相互作用对病毒感染、病毒RNA稳定、复制等功能的影响。本项目的完成将对探索EV71-2A蛋白新功能、以及揭示新的EV71病毒感染分子机制、为抗病毒治疗提供理论依据等都具有重要意义。

EV71(Enterovirus 71)急性感染可引起手足口病及中枢神经系统损害，严重可导致死亡，其感染和流行已成为危害人类健康的重大社会问题。EV71 病毒非结构蛋白2A 具有蛋白酶活性，是转录激活因子，在病毒感染和复制中具有重要功能，但其调控方式及作用机制目前尚不十分清楚。我们前期工作通过酵母双杂交筛选出EV71-2A 的互作蛋白—RASSF4 蛋白，且GST-Pull down 实验初步证实了它们的相互作用。本项目我们利用荧光共定位、序列突变分析等多种方法进一步确证了它们的相互作用及结合位点，利用蛋白酶活性分析、转录活性分析、RNA 分析、Western blotting 和RT-PCR 等探索了EV71-2A 与RASSF4 相互作用对病毒感染、病毒RNA 稳定、复制等功能的影响。结果显示，EV71-2A蛋白酶活性抑制了外源性RASSF4在细胞中的表达，其作为转录激活因子促进细胞中内源性RASSF4的转录，从而促进内源性RASSF4的表达。在EV71病毒感染的晚期阶段，EV71抑制pAKT，而且RASSF4通过增加EV71复制和病毒滴度使得抑制pAKT的作用时间提前，RASSF4对EV71的这种作用是依赖于RASSF4作用于病毒进入宿主细胞后完成的。本项目的完成对探索EV71-2A 蛋白新功能、以及揭示新的EV71 病毒感染分子机制、为抗病毒治疗提供理论依据等都具有重要意义。