小肝癌及癌前病变基因组甲基化序贯变异特征与早期分子诊断

目前对肝癌癌前病变的表观遗传学特征、癌变潜能以及向早期小肝癌演变过程中的序贯分子事件了解有限，影响了临床对肝癌癌前病变和早期小肝癌诊断与治疗水平的提高。肿瘤抑制基因CpG岛高甲基化及全基因组低甲基化程度是反映表观遗传学和肝癌多阶段发展过程的重要分子标志。本研究采用显微组织切割基础上的CpG岛甲基化特异性PCR及焦磷酸测序技术，选择手术切除的正常肝对照、低度异型增生结节→高度异型增生结节→微小癌→小肝癌5组约200例标本，进行20个特定肿瘤抑制基因CpG岛及全基因组甲基化水平的检测，将CpG岛甲基化表型、基因组低甲基化程度与4组病变病理生物学参数之间的相关性进行统计学分析。本研究预计将确定不同进展阶段多基因CpG岛高甲基化的序贯模式及全基因组低甲基化的程度，确立癌前病变及早期小肝癌的表观遗传学分子诊断谱，为进一步提高肝癌的诊疗水平，改善患者预后提供理论及实践上的依据。

目前对异型增生结节及早期肝癌的表观遗传学特征、癌变潜能以及向早期小肝癌演变过程中的序贯分子事件缺乏研究，制约了肝脏外科的进一步发展。CpG岛高甲基化及全基因组低甲基化程度是反映表观遗传学和肝癌多阶段发展过程的重要分子标志。本研究选择我院手术切除的癌旁肝硬化组织→异型增生结节(低度异型增生结节→高度异型增生结节)→微小肝细胞癌4组共约34例标本，采用显微组织切割基础上的基因组DNA抽提，对ASPP1、BASP1、EFEMP-1r、SFRP-2、RASSF1A、p16、TMS1、GSTP1、MGMT-r、E-Cadherin-r、PGM1、SEMA3B、SOCS1-r、FHIT等14个基因启动子附近的CpG岛甲基化程度，通过DNA亚硫酸氢钠修饰、PCR扩增、克隆测序的方法定量检测。研究表明BASP1、EFEMP-1r、SFRP-2、MGMT-r4个抑癌基因在肝硬化结节、异型增生结节直至肝癌的演进过程中，启动子CpG岛甲基化程度呈现递增趋势，说明在肝细胞癌的多步骤发病过程中，抑癌基因甲基化程度增高是一个逐步累积的过程，可以通过基因甲基化程度差异对早期小肝癌与高度异型增生结节进行鉴别诊断。全基因组低甲基化程度通过5-甲基胞嘧啶免疫组化将CpG岛甲基化表型、基因组低甲基化程度与5组病变之间综合病理生物学参数的相关性进行统计学分析。发现肝细胞癌中5-MC表达阳性率显著高于异型增生结节及肝硬化组。本研究确定了不同进展阶段4个基因CpG岛高甲基化的序贯模式及全基因组低甲基化的程度，确立癌前病变及早期肝癌的表观学分子诊断谱，为进一步提高肝癌的诊疗水平提供理论及实践上的依据。