槐耳均一多糖蛋白抗肿瘤活性及其作用机制研究

The research and development of anti-tumor traditional Chinese medicine (TCM) have become hot spots in recent years, and Huaier as a kind of anti-tumor drug receives more and more attention. Studies have revealed that active ingredients of Huaier are polysaccharide proteins, it still remains unclear what these polysaccharide proteins are. In addition, the anti-tumor molecular mechanisms of Huaier remain poorly understood. We have found that Huaier aqueous extract obviously inhibits mTOR activity and the proliferation of human hepatocellular carcinoma cell. Moreover, cells with hyperactive mTOR are more sensitive to Huaier aqueous extract treatment. Four kinds of homogeneous polysaccharide proteins have been separated and identified from Huaier aqueous extract in the previous work. Research on in vivo anti-tumor activity and mechanisms of Huaier from aspects of immunity, apoptosis, proliferation, angiogenesis, invasion and migration will be conducted. Furthermore, this project will elucidate regulatory mechanisms and effects of Huaier on mTOR signal pathway, one of the most frequently deregulated pathways in human cancer, by applying methods in genomics and molecular biology. This study has important application significance for cancer therapy, provides a new view for the development of therapeutic drug of cancers caused by hyperactive mTOR signaling and the scientific foundation for clinical medication, and has a positive role in disseminating Chinese medical culture and promoting the development of traditional Chinese medicine (TCM).

近年来中药抗肿瘤药物的开发和研究已成为热点，其中槐耳作为抗肿瘤药物受到了普遍关注。文献报道槐耳的有效成分为槐耳多糖蛋白，究竟是何种均一多糖蛋白，至今尚未清楚。此外，槐耳抗肿瘤的作用机制不是很明确。本项目前期发现槐耳清膏对人肝癌细胞增殖具有明显的抑制作用，能够抑制人肝癌细胞mTOR的活性，对mTOR活化的细胞具有更好的增殖抑制效果。本项目前期已经从槐耳清膏中分离鉴定了4种均一多糖蛋白。为了揭示槐耳真正的药效成分以及作用机理，本项目将进一步研究其在体内的抗肿瘤活性，并从免疫、增殖与凋亡、血管形成、侵袭迁移等方面，阐明槐耳抗肿瘤的作用机制。此外，运用基因组学和分子生物学的方法，研究槐耳对mTOR信号通路的作用以及调控机制。本研究对肿瘤治疗有重要的应用价值，为寻找治疗mTOR信号通路活化所致肿瘤的药物提供一个新的研究视角，为临床用药提供科学依据，对弘扬中医药文化和促进中医药发展具有积极的推动作用。

近年来中药抗肿瘤药物的开发和研究已成为热点，其中槐耳作为抗肿瘤药物受到了普遍关注。文献报道槐耳的有效成分为槐耳多糖蛋白，究竟是何种均一多糖蛋白，至今尚未清楚。此外，槐耳抗肿瘤的作用机制不是很明确。在本项目研究中我们从细胞增殖、凋亡、迁移、自噬、免疫等方面开展了槐耳均一多糖蛋白TP-3体外抗肿瘤活性及作用机制研究。此外，还进一步完成了TP-3的体内抗肿瘤作用评价。我们还开展了槐耳对mTOR活化所致肿瘤（包括结节性硬化症）以及肝癌和前列腺癌等肿瘤的作用研究工作，而且从细胞增殖、周期、凋亡、迁移侵袭、自噬以及作用靶标等方面开展了相关作用机制研究工作。通过本项目研究我们发现mTOR活化的细胞对槐耳清膏的敏感性更高，槐耳清膏能够抑制TSC2缺失的大鼠子宫肌瘤细胞ELT3体内成瘤能力。我们还发现了槐耳清膏能够激活mTOR。此外，槐耳清膏能够通过下调JAK2/STAT3和MAPK信号通路抑制结节性硬化症细胞模型的增殖和转移能力。槐耳清膏能够通过下调Lamin B1的表达并且增强NOV/CCN3的表达从而抑制人肝癌细胞SK-HEP-1的增殖和侵袭能力。槐耳能够诱导人前列腺癌PC3细胞发生自噬性细胞死亡。此外，我们发现槐耳均一多糖蛋白TP-3能够直接或间接显著抑制人肝癌SK-HEP-1和HepG2细胞的增殖，而且能够明显促进SK-HEP-1细胞的凋亡和自噬以及抑制SK-HEP-1细胞的体外迁移能力。TP-3能够促进小鼠巨噬细胞RAW264.7中NO、TNF-α、IL-6的生成和释放，提示TP-3具有较好的免疫增强活性。TP-3给药能够显著抑制HepG2细胞的体内成瘤能力。本项目研究结果揭示槐耳可能是一个潜在的治疗mTOR信号异常所致肿瘤（包括治疗结节性硬化症）的药物，从而为这类肿瘤的治疗提供了新的方向。本研究为槐耳抗肝癌以及前列腺癌作用机制增添了新的内容，也为槐耳临床用药提供了新的科学依据。本研究提示TP-3可能在槐耳抗肿瘤作用中占据了重要位置，是一种有待开发的具有一定前景的能够用于肿瘤治疗的候选药物。本项目研究对肿瘤治疗具有重要的应用价值，对弘扬中医药文化和促进中医药发展具有积极的推动作用。