基于“有效部位/成分—疗效—品质”一体的甘草质量标准提升研究

Standardization of quality control of traditional Chinese Medicine is the key to the world. Currently, there are bottleneck and main problem of quality control. Such as index components are inaccurately filtered, content range is incorrectly formulated and dose-effect relationship is not clear. Thus, in order to promote the quality standard of Glycyrrhiza, we raised a idea of integrative “effective parts/ingredients- therapeutic effects -quality”. Firstly, flavonoids and saponins of Glycyrrhiza are isolated accurately and the fingerprints are established by HPLC. Application of grey correlation analysis, partial least squares regression analysis and correlation analysis comprehensive evaluate spectrum-effect relationships about strengthening spleen and benefiting vital qi, relieving spasm and pain, expelling phlegm to stop cough and anti-inflammatory effect. Then structures of active components are determinated by LC-MS together with column chromatography. The efficacy material basis of Glycyrrhiza will clear by these methods. Finally, to establish a quantitative analysis of multi-components by single-marker enhance the quality control standards of Glycyrrhiza roundly. This method provide a good research idea for comprehensive promote the quality control of Chinese medicine through the angle of correlation between chemical constituents and therapeutic effect.

中药质量控制的标准化是其走向世界的通行证。当前，我国中药质量控制与评价的瓶颈与关键问题是药材指标成分选不准、含量范围定不准、量效关联不强。基于此，本课题提出“部位/成分—疗效—品质”一体的中药材质量控制研究思路，进行甘草质量标准提升研究。首先对甘草黄酮和皂苷类成分进行精确分离，并建立20批甘草药材、黄酮、皂苷HPLC指纹图谱。然后应用灰色关联分析、偏最小二乘回归分析、相关分析等方法综合分析评价甘草黄酮及皂苷补脾益气、缓急止痛、祛痰止咳、抗炎的谱效关系，通过液质联用技术结合柱色谱确定与疗效相关的有效成分的结构，最终确定甘草黄酮及皂苷类成分的药效物质基础。最后通过“一测多评”法, 以一个内标对多个药效指标加以控制，达到全面控制甘草药材质量标准的目的。为从“整体作用特点、成分疗效关联的角度”提升中药现行标准提供研究思路和模式。

1.以21个不同产地甘草为研究对象，通过水提醇沉、聚酰胺柱等对其中黄酮类及皂苷类成分进行拆分富集，确定两类成分精确分离。检测21个产地黄酮部位总黄酮含量约为65%，皂苷部位总皂苷的含量约为62%。采用HPLC法建立21个产地甘草黄酮类和皂苷类成分的指纹图谱，运用“中药色谱指纹图谱相似性评价系统软件”，确定黄酮类成分指纹图谱15个共有峰，皂苷类成分指纹图谱7个共有峰。.2.建立补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛的药理模型，分别对甘草黄酮及其皂苷类成分进行药效学研究。结果显示，甘草黄酮类成分是“祛痰止咳”和 “清热解毒”的物质基础，皂苷类成分是“补脾益气”和“缓急止痛”的物质基础。.3.采用灰色关联分析、偏最小二乘回归、相关分析三种分析方法对甘草黄酮类及皂苷类成分指纹图谱特征峰所代表的化学成分信息与药效的相关性进行分析；综合分析结果显示，清热解毒、祛痰止咳功效上发挥作用的甘草黄酮类有效成分分别为1、3、4、5、6、7、8、9、12、14、15；补脾益气和缓急止痛功效上发挥作用的甘草皂苷类有效成分分别1、2、4、5、6。.4.采用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱，结合Chemspider等数据库，对筛选出的共有峰进行归属，共确定19个化合物的结构。结果显示，与疗效相关的黄酮类1、3、4、5、6、7、12、14、15分别为甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、新异甘草苷、甘草查尔酮B、甘草素、异甘草素、甘草查尔酮C、甘草查尔酮A。与疗效相关的皂苷类成分1、4、5、6分别为甘草内酯、甘草次酸十八酯、甘草酸、18α-甘草酸。.5.以所确定的与药效关联度大的指标性成分芹糖异甘草苷、异甘草苷、新异甘草苷、甘草查尔酮B、甘草酸等为“一测多评“重点关注的成分，建立“一测多评“测定方法，并验证其准确性。结果显示，一测多评可以评价甘草中与疗效相关的成分。.综上，本项目完成了“部位/成分—疗效—品质”一体的中药材质量控制研究思路，为药材质量控制标准的全面提升提供有效的研究手段。